| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一部分 试验研究 CRISPR/Cas9介导hFAD3基因在牛NCAPG-LCORL位点定点整合研究 | 第13-75页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 1 材料与方法 | 第15-38页 |
| ·材料 | 第15-16页 |
| ·方法 | 第16-38页 |
| 2 结果 | 第38-69页 |
| ·pCas Guide-B切割载体的构建及活性验证 | 第38-40页 |
| ·hFAD3基因定点整合载体的构建 | 第40-54页 |
| ·切割载体与定点整合载体共转染渤海黑牛胎儿成纤维细胞 | 第54-55页 |
| ·转染后细胞DNA、RNA、脂肪酸水平检测 | 第55-61页 |
| ·阳性单克隆细胞的筛选及相关检测 | 第61-69页 |
| 3 讨论 | 第69-74页 |
| ·整合位点的选择 | 第69-70页 |
| ·动物安全转基因技术的探索 | 第70-71页 |
| ·核基质结合区(MAR)序列对外源基因表达的影响 | 第71页 |
| ·hFAD3基因的定点整合对位点旁侧基因的影响 | 第71-72页 |
| ·hFAD3基因的表达对细胞中ω-6/ω-3 PUFA比值的影响 | 第72-73页 |
| ·hFAD3基因的表达对脂肪相关基因表达的影响 | 第73-74页 |
| ·CRISPR/Cas9技术介导的外源基因定点整合研究初步探索 | 第74页 |
| 4 结论 | 第74-75页 |
| 第二部分 文献综述 哺乳动物转基因整合位点的选择和鉴定 | 第75-86页 |
| 1 定点整合位点的选择要素 | 第75页 |
| 2 常用整合位点介绍 | 第75-82页 |
| ·Rosa26位点 | 第76-78页 |
| ·H11位点 | 第78-80页 |
| ·CSN2位点 | 第80页 |
| ·H2-Tw3位点 | 第80-81页 |
| ·Hprt位点 | 第81页 |
| ·NCAPG-LCORL位点 | 第81-82页 |
| 3 转基因整合位点的鉴定 | 第82-85页 |
| ·基于PCR的染色体步移技术 | 第82-85页 |
| ·第二代基因组测序技术 | 第85页 |
| 4 结语 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-93页 |
| 攻读硕士期间发表及待发表的论文 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
