| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-16页 |
| 1 绪论 | 第16-31页 |
| ·石油压裂液 | 第16-17页 |
| ·压裂液的主要作用和基本要求 | 第16页 |
| ·压裂液的种类 | 第16-17页 |
| ·压裂液添加剂 | 第17-20页 |
| ·增稠剂 | 第18页 |
| ·破胶剂 | 第18-20页 |
| ·其他添加剂 | 第20页 |
| ·β-甘露聚糖酶研究进展 | 第20-29页 |
| ·β-甘露聚糖酶概况 | 第20-21页 |
| ·β-甘露聚糖酶的来源和性质 | 第21-23页 |
| ·β-甘露聚糖酶的分子结构 | 第23-24页 |
| ·β-甘露聚糖酶的作用方式和水解产物 | 第24-25页 |
| ·β-甘露聚糖酶产生菌的诱变育种 | 第25-27页 |
| ·β-甘露聚糖酶的分子生物学研究 | 第27-28页 |
| ·β-甘露聚糖酶的分离纯化 | 第28页 |
| ·β-甘露聚糖酶的应用 | 第28-29页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第29-30页 |
| ·本课题研究的主要内容和创新点 | 第30-31页 |
| 2 降解瓜尔胶菌株的筛选和鉴定 | 第31-41页 |
| ·实验材料和仪器 | 第31-33页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31-32页 |
| ·主要试剂的配制 | 第32页 |
| ·主要培养基 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-36页 |
| ·菌株的筛选方法 | 第33-34页 |
| ·菌株生理生化特性研究 | 第34-35页 |
| ·菌株16s rDNA鉴定 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-38页 |
| ·甘露糖标准曲线 | 第36页 |
| ·产甘露聚糖酶菌株的筛选 | 第36-37页 |
| ·菌株的形态及生理生化特性 | 第37-38页 |
| ·菌株的分子鉴定 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| ·本章小结 | 第40-41页 |
| 3 瓜尔胶和魔芋胶降解菌的诱变育种 | 第41-57页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·出发菌株 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·主要培养基 | 第41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-45页 |
| ·出发菌株生长曲线的测定 | 第41-42页 |
| ·出发菌株产酶历程的测定 | 第42页 |
| ·菌株的紫外诱变 | 第42-44页 |
| ·菌株的甲基磺酸乙酯诱变 | 第44页 |
| ·菌株的~(60)Co诱变 | 第44-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-54页 |
| ·出发菌株的生长曲线 | 第45-47页 |
| ·出发菌株的产酶历程 | 第47-48页 |
| ·紫外诱变结果和遗传稳定性 | 第48-50页 |
| ·甲基磺酸乙酯诱变结果和遗传稳定性 | 第50-53页 |
| ·~(60)Co诱变结果和遗传稳定性 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| ·本章小结 | 第55-57页 |
| 4 B.subtilis WLY-12的Man基因的克隆与表达 | 第57-70页 |
| ·实验材料 | 第57页 |
| ·菌株 | 第57页 |
| ·主要试剂 | 第57页 |
| ·主要仪器 | 第57页 |
| ·主要试剂配制和培养基 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-63页 |
| ·B.subtilis Man基因的克隆 | 第57-59页 |
| ·pPIC9K/Man重组表达载体的构建及鉴定 | 第59-61页 |
| ·转化 Pichia pastoris GS115 | 第61-62页 |
| ·重组酵母菌甘露聚糖酶的诱导表达 | 第62页 |
| ·丙酮沉淀蛋白 | 第62页 |
| ·表达产物SDS-PAGE检测 | 第62-63页 |
| ·结果与分析 | 第63-67页 |
| ·PCR扩增保守序列 | 第63页 |
| ·PCR扩增Man基因序列 | 第63-64页 |
| ·重组质粒pMD18-T/Man的构建及鉴定 | 第64-65页 |
| ·pPIC9K/Man重组表达载体的构建及鉴定 | 第65-66页 |
| ·重组质粒pPIC9K/Man的线性化 | 第66页 |
| ·直接PCR鉴定重组子 | 第66-67页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| ·本章小结 | 第69-70页 |
| 5 重组β-甘露聚糖酶的分离纯化和酶学特性的研究 | 第70-85页 |
| ·实验材料 | 第70页 |
| ·菌株 | 第70页 |
| ·主要试剂 | 第70页 |
| ·主要仪器 | 第70页 |
| ·主要试剂配制 | 第70页 |
| ·实验方法 | 第70-74页 |
| ·粗酶液的制备 | 第70页 |
| ·甘露聚糖酶活性的测定 | 第70-71页 |
| ·蛋白含量测定 | 第71页 |
| ·硫酸铵盐析 | 第71页 |
| ·透析脱盐 | 第71-72页 |
| ·聚乙二醇浓缩 | 第72页 |
| ·DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析 | 第72页 |
| ·超滤管浓缩 | 第72-73页 |
| ·Sephadex G-75凝胶过滤 | 第73页 |
| ·变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第73页 |
| ·肽段序列的飞行时间质谱分析(MALDI-TOF-MS) | 第73页 |
| ·重组甘露聚糖酶的酶学特性 | 第73-74页 |
| ·结果与分析 | 第74-82页 |
| ·蛋白质标准曲线 | 第74页 |
| ·硫酸铵盐析饱和度 | 第74-75页 |
| ·DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析的缓冲液pH值的确定 | 第75页 |
| ·目的蛋白的分离纯化 | 第75-76页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第76页 |
| ·飞行质谱结果 | 第76-77页 |
| ·酶的最适pH值和pH值稳定性实验 | 第77-79页 |
| ·酶的最适温度和热稳定性性实验 | 第79-80页 |
| ·金属离子、EDTA和SDS对酶活性的影响 | 第80-81页 |
| ·盐浓度对酶活性的影响 | 第81-82页 |
| ·米氏常数及最大反应速率的测定 | 第82页 |
| ·讨论 | 第82-83页 |
| ·本章小结 | 第83-85页 |
| 结论 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-99页 |
| 附录 | 第99-102页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
