| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 1 绪论 | 第12-24页 |
| ·课题背景 | 第12-13页 |
| ·研究现状 | 第13-17页 |
| ·植物中Prxs的种类和亚细胞定位 | 第13-14页 |
| ·2-Cys Prx的催化活性 | 第14-15页 |
| ·2-Cys Prx的结构特点 | 第15-16页 |
| ·2-Cys Prx的生理特性 | 第16-17页 |
| ·发展趋势及展望 | 第17-18页 |
| ·植物表达载体 | 第18页 |
| ·RNA干扰 | 第18-20页 |
| ·RNAi的发现 | 第18页 |
| ·RNAi的作用机制 | 第18-19页 |
| ·RNAi的特性 | 第19页 |
| ·RNAi在植物研究中的应用 | 第19-20页 |
| ·Gateway技术 | 第20-22页 |
| ·Gateway技术简介 | 第20-21页 |
| ·Gateway技术的原理 | 第21-22页 |
| ·Gateway技术的特点 | 第22页 |
| ·Gateway技术在基因沉默中的应用 | 第22页 |
| ·农杆菌转化法 | 第22-23页 |
| ·本实验的内容及目的 | 第23页 |
| ·实验技术路线 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-37页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·菌株与质粒 | 第24页 |
| ·分子生物学试剂及生化试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·主要培养基 | 第24-25页 |
| ·2-Cys Prx基因的克隆 | 第25-28页 |
| ·植物材料的准备 | 第25页 |
| ·引物的设计与合成 | 第25页 |
| ·龙江911烟草总RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·2-Cys Prx基因cDNA第一链的合成 | 第26页 |
| ·2-Cys Prx基因cDNA全长的扩增 | 第26-27页 |
| ·2-Cys Prx基因cDNA的纯化 | 第27页 |
| ·2-Cys Prx基因全长与克隆载体pJET Vector连接 | 第27页 |
| ·重组质粒(pJET-2-Cys Prx)转化大肠杆菌Trans1-T1 | 第27-28页 |
| ·阳性克隆的筛选及鉴定 | 第28页 |
| ·菌种保存与测序 | 第28页 |
| ·植物过表达载体的构建及筛选鉴定 | 第28-30页 |
| ·植物过表达载体prokⅡ | 第28-29页 |
| ·提取质粒载体prokⅡ | 第29-30页 |
| ·质粒载体prokⅡ和2-Cys Prx基因cDNA的双酶切反应 | 第30页 |
| ·酶切产物的连接 | 第30页 |
| ·转化及筛选鉴定 | 第30页 |
| ·利用Gateway技术构建植物抑制表达载体 | 第30-33页 |
| ·植物抑制表达载体pK7GWIWG2D(Ⅱ) | 第30-31页 |
| ·干扰片段的设计 | 第31页 |
| ·利用attB-RNAi-S/A引物对2-Cys Prx进行PCR | 第31-32页 |
| ·利用attB-adapter-A/S引物进行二次PCR | 第32页 |
| ·PCR产物纯化 | 第32页 |
| ·BP反应 | 第32页 |
| ·LR反应 | 第32-33页 |
| ·植物表达载体导入根癌农杆菌 | 第33页 |
| ·制备根癌农杆菌感受态细胞 | 第33页 |
| ·电击法转化LBA4404 | 第33页 |
| ·农杆菌的筛选与鉴定 | 第33页 |
| ·植物表达载体导入根癌农杆菌 | 第33-34页 |
| ·无菌苗的获得 | 第33-34页 |
| ·根癌农杆菌介导的烟草遗传转化 | 第34页 |
| ·烟草转基因植株的检测 | 第34-36页 |
| ·烟草转基因植株的分子生物学检测 | 第34-36页 |
| ·烟草过表达转基因植株对盐胁迫的响应实验 | 第36-37页 |
| ·实验处理 | 第36页 |
| ·测定项目和方法 | 第36页 |
| ·数据处理方法 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-52页 |
| ·2-Cys Prx基因cDNA全长的获得 | 第37-39页 |
| ·总RNA的提取 | 第37页 |
| ·2-Cys Prx基因cDNA全长的扩增 | 第37-39页 |
| ·过表达载体prokⅡ-2-Cys Prx的构建 | 第39-41页 |
| ·制备prokⅡ | 第39页 |
| ·质粒载体prokⅡ的酶切反应 | 第39页 |
| ·用含XbaⅠ、KpnⅠ酶切位点的引物对2-Cys Prx基因PCR | 第39-40页 |
| ·目的基因的酶切反应 | 第40页 |
| ·prokⅡ-2-Cys Prx连接产物的筛选及鉴定 | 第40-41页 |
| ·植物抑制表达载体RNAi的构建 | 第41-44页 |
| ·干扰片段的扩增 | 第41-42页 |
| ·二次PCR | 第42页 |
| ·BP反应产物的筛选及鉴定 | 第42-43页 |
| ·LR反应产物的筛选及鉴定 | 第43页 |
| ·RNAi测序结果 | 第43-44页 |
| ·植物表达载体导入根癌农杆菌 | 第44-45页 |
| ·电击法转化根癌农杆菌LBA4404 | 第44页 |
| ·过表达农杆菌阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第44-45页 |
| ·抑制表达农杆菌阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第45页 |
| ·根癌农杆菌介导的烟草遗传转化 | 第45-46页 |
| ·烟草遗传转化体系 | 第45页 |
| ·转化烟草植株 | 第45-46页 |
| ·烟草转基因植株的检测 | 第46-48页 |
| ·过表达转基因烟草中DNA的PCR检测 | 第46-47页 |
| ·过表达转基因烟草中的半定量RT-PCR检测 | 第47页 |
| ·抑制表达转基因烟草中DNA的PCR检测 | 第47-48页 |
| ·抑制表达转基因烟草中的半定量RT-PCR检测 | 第48页 |
| ·烟草2-Cys Prx过表达转基因植株对盐胁迫的响应实验结果 | 第48-51页 |
| ·盐胁迫对2-Cys Prx过表达转基因烟草叶片SOD和APX活性及H_2O_2含量的影响 | 第48-49页 |
| ·盐胁迫对2-Cys Prx过表达转基因烟草叶片PSⅡ电子供体侧的影响 | 第49页 |
| ·盐胁迫对2-Cys Prx过表达转基因对烟草叶片PSⅡ电子受体侧的影响 | 第49-50页 |
| ·2-Cys Prx过表达转基因对烟草叶片F_v/F_m、F_v/F_o和P/_ABS的影响 | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
