| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-26页 |
| 1. α,β--globin基因簇概述 | 第10-12页 |
| 2. β-globin基因与疾病 | 第12-13页 |
| 3. DNA甲基化 | 第13-17页 |
| ·DNA甲基化概述 | 第13-16页 |
| ·DNA甲基化与β-globin基因的表达调控 | 第16-17页 |
| 4. DNA甲基化酶(DNMTs) | 第17-23页 |
| ·DNMTs概述 | 第17-19页 |
| ·DMT3A概述 | 第19-23页 |
| 5. 组蛋白修饰 | 第23-26页 |
| ·组蛋白修饰概述 | 第23-24页 |
| ·组蛋白修饰与β-globin基因的表达调控 | 第24-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-44页 |
| 1. 前言 | 第26-29页 |
| 2. 实验试剂与仪器 | 第29页 |
| ·实验试剂 | 第29页 |
| ·实验仪器 | 第29页 |
| 3. 实验方法 | 第29-44页 |
| ·计算机模拟DNMT3A与H4R3me2s的结合结构图 | 第29-30页 |
| ·人类DNMT3A基因克隆 | 第30-32页 |
| ·DNMT3A突变体的构建 | 第32-34页 |
| ·ADD3A野生型和突变型原核表达载体的构建 | 第34-35页 |
| ·蛋白表达与纯化 | 第35-36页 |
| ·peptide pull down assay | 第36-37页 |
| ·DNMT3A真核表达载体的选择 | 第37-39页 |
| ·突变体的真核表达载体构建 | 第39-40页 |
| ·野生型和突变体DNMT3A过表达的K562细胞株的构建 | 第40页 |
| ·γ-gene的mRNA水平检测 | 第40-41页 |
| ·DNA甲基化分析 | 第41-42页 |
| ·蛋白质免疫共沉降(co-IP) | 第42-44页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第44-62页 |
| 第一节 D529A突变减弱ADD_(3A)与H4R3me2s结合 | 第44-55页 |
| 1. 计算机模拟结果 | 第44页 |
| 2. DNMT3A的克隆 | 第44-46页 |
| 3. DNMT3A定点氨基酸突变体的构建 | 第46-47页 |
| 4. 原核表达载体的构建 | 第47-49页 |
| 5. GST-ADD_(3A)的诱导与纯化 | 第49页 |
| 6. His-ADD_(3A)的诱导与纯化 | 第49-51页 |
| 7. Peptide pull down assays | 第51-53页 |
| 讨论 | 第53-55页 |
| 第二节 DNMT3A-D529A突变对γ-globin表达影响 | 第55-62页 |
| 1. 真核表达载体的构建与选择 | 第55-57页 |
| 2. 稳定细胞株的构建 | 第57页 |
| 3. γ-gene mRNA水平 | 第57页 |
| 4. 甲基化水平 | 第57-59页 |
| 5. PRMT5与DNMT3A的结合 | 第59-60页 |
| 讨论 | 第60-62页 |
| 全文总结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 附录一 | 第71-73页 |
| 附录二 | 第73-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
