| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-36页 |
| ·板栗疫病菌与低毒病毒 | 第13-20页 |
| ·板栗疫病菌 | 第13页 |
| ·低毒病毒 | 第13-15页 |
| ·板栗疫病菌与低毒病毒的相互作用 | 第15-16页 |
| ·受低毒病毒调控的信号传导途径 | 第16-18页 |
| ·低毒病毒编码蛋白质的功能研究 | 第18-20页 |
| ·病毒宿主相互作用的模式系统研究 | 第20-22页 |
| ·蛋白质组学研究概述 | 第22-28页 |
| ·蛋白质组学研究的基本内容 | 第22-23页 |
| ·蛋白质组学中常用的提取、分离技术 | 第23-25页 |
| ·蛋白质组学中的质谱鉴定技术 | 第25-26页 |
| ·蛋白质组学中的生物信息学分析 | 第26-28页 |
| ·几种重要的模式及致病真菌的蛋白质组学研究 | 第28-30页 |
| ·微生物分泌蛋白质组研究进展 | 第30-33页 |
| ·囊泡介导的细胞内运输 | 第33-34页 |
| ·本研究的主要内容和目的意义 | 第34-36页 |
| 第二章 适合于二维液相系统的板栗疫病菌总蛋白质提取方法的建立与优化 | 第36-53页 |
| ·材料与方法 | 第36-39页 |
| ·真菌培养条件 | 第36页 |
| ·真菌总蛋白质样品的提取 | 第36-37页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第37页 |
| ·使用二维液相系统分析真菌总蛋白质样品 | 第37-39页 |
| ·液相系统平衡 | 第37-38页 |
| ·样品运行 | 第38页 |
| ·液相系统的维护 | 第38-39页 |
| ·第二维组分的SDS-PAGE鉴定 | 第39页 |
| ·双向电泳分析优化后总蛋白样品 | 第39页 |
| ·差异蛋白质编码基因的定量RT-PCR | 第39页 |
| ·结果与分析 | 第39-47页 |
| ·板栗疫病菌总蛋白质的提取效率 | 第39-40页 |
| ·维液相分析结果 | 第40-41页 |
| ·第二维组分的SDS-PAGE聚丙烯酰胺电泳结果 | 第41-42页 |
| ·总蛋白质双向电泳结果比较 | 第42-46页 |
| ·差异表达蛋白质的转录水平分析 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-53页 |
| ·板栗疫病菌蛋白质样品应用不同蛋白质组研究平台的分析结果比较 | 第47页 |
| ·低毒病毒侵染对宿主糖酵解和三羧酸循环的调控 | 第47-48页 |
| ·低毒病毒侵染对宿主体内甲基化进程相关基因的影响 | 第48-49页 |
| ·低毒病毒侵染对宿主体内热休克蛋白的调控 | 第49-51页 |
| ·减少真菌毒力因子cyclophilin A的积累量 | 第51页 |
| ·差异表达蛋白质在转录水平的调控趋势 | 第51-53页 |
| 第三章 板栗疫病菌分泌蛋白质组的双向电泳分析及表达谱构建 | 第53-67页 |
| ·材料与方法 | 第53-57页 |
| ·真菌培养条件 | 第53页 |
| ·真菌分泌蛋白质样品提取 | 第53-54页 |
| ·超滤法 | 第53页 |
| ·硫酸铵分级沉淀 | 第53页 |
| ·改良sevage法 | 第53-54页 |
| ·分泌蛋白质样品定量 | 第54页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第54页 |
| ·双向电泳分析 | 第54-55页 |
| ·第一向等电聚焦 | 第54-55页 |
| ·胶条平衡 | 第55页 |
| ·第二向SDS-PAGE电泳 | 第55页 |
| ·染色 | 第55-56页 |
| ·凝胶图像处理 | 第56页 |
| ·蛋白质胶内酶解及萃取 | 第56页 |
| ·质谱鉴定 | 第56-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-63页 |
| ·超滤浓缩法提取的分泌蛋白质样品质量 | 第57页 |
| ·过硫酸铵分级沉淀提取的分泌蛋白质样品质量 | 第57页 |
| ·改良sevage法提取的分泌蛋白质样品质量 | 第57-58页 |
| ·分泌蛋白的质谱鉴定 | 第58-62页 |
| ·板栗疫病菌分泌蛋白质组的功能分类 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-67页 |
| ·真菌降解植物细胞壁相关的分泌蛋白质 | 第63-64页 |
| ·分泌到胞外的应激类蛋白质 | 第64-65页 |
| ·分泌蛋白质相关的生物信息学分析 | 第65-66页 |
| ·已经报道过的几种分泌蛋白质 | 第66-67页 |
| 第四章 低毒病毒调控的板栗疫病菌分泌蛋白质组的差异分析比较和高峰度分泌蛋白编码基因的敲除 | 第67-75页 |
| ·材料与方法 | 第67-68页 |
| ·真菌培养条件 | 第67页 |
| ·高峰度分泌蛋白编码基因缺失突变株的构建 | 第67页 |
| ·菌丝融合 | 第67-68页 |
| ·真菌分泌蛋白质样品提取 | 第68页 |
| ·双向电泳分析 | 第68页 |
| ·结果与分析 | 第68-71页 |
| ·高峰度分泌蛋白编码基因缺失突变株的PCR验证 | 第68-69页 |
| ·高峰度分泌蛋白编码基因缺失突变株的Southern杂交验证 | 第69页 |
| ·高峰度分泌蛋白编码基因缺失突变株的Western Blot验证 | 第69页 |
| ·高峰度分泌蛋白编码基因缺失突变株的的表型和致病力观察 | 第69-70页 |
| ·受低毒病毒感染的分泌蛋白质组差异比较 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-75页 |
| ·通过缺失高丰度分泌表达基因提高分泌蛋白质凝胶分辨率 | 第71-72页 |
| ·低毒病毒侵染对板栗疫病菌分泌蛋白质组的影响 | 第72-74页 |
| ·进一步实验设计 | 第74-75页 |
| 第五章 受低毒病毒调控的板栗疫病菌囊泡蛋白质组的双向电泳分析和差异分析比较 | 第75-85页 |
| ·材料与方法 | 第75-77页 |
| ·真菌培养条件 | 第75页 |
| ·真菌囊泡蛋白质样品制备 | 第75-76页 |
| ·菌丝收集 | 第75页 |
| ·囊泡的提取和纯化 | 第75页 |
| ·囊泡裂解和蛋白质纯化 | 第75-76页 |
| ·囊泡蛋白质样品定量 | 第76页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第76页 |
| ·双向电泳分析 | 第76页 |
| ·第一向等电聚焦 | 第76页 |
| ·胶条平衡 | 第76页 |
| ·第二向SDS-PAGE电泳 | 第76页 |
| ·染色 | 第76页 |
| ·凝胶图像处理 | 第76-77页 |
| ·蛋白质胶内酶解 | 第77页 |
| ·质谱鉴定 | 第77页 |
| ·定量RT-PCR | 第77页 |
| ·p48抗体制备 | 第77页 |
| ·结果及分析 | 第77-80页 |
| ·囊泡蛋白的双向差异凝胶电泳分析 | 第77-78页 |
| ·定量RT-PCR分析囊泡差异表达蛋白质 | 第78-80页 |
| ·使用p48抗体检测囊泡蛋白质 | 第80页 |
| ·讨论 | 第80-85页 |
| ·低毒病毒侵染对板栗疫病菌囊泡运输功能的影响 | 第80-81页 |
| ·囊泡差异表达蛋白质编码基于的转录水平分析 | 第81页 |
| ·低毒病毒编码的几个成熟蛋白的加工形式 | 第81-85页 |
| 第六章 结论 | 第85-87页 |
| ·本文的主要结论 | 第85页 |
| ·有待进一步研究的科学问题 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-105页 |
| 附录 | 第105-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第122页 |
