| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 一、前言 | 第11-20页 |
| ·鞘脂 | 第11页 |
| ·鞘脂的代谢 | 第11-12页 |
| ·鞘脂类代谢障碍 | 第12-13页 |
| ·鞘脂代谢依赖鞘脂酶激活蛋白 | 第13页 |
| ·SAPOSINS蛋白和脂质的相互作用 | 第13-14页 |
| ·SAPOSINS-LIKE蛋白 | 第14-18页 |
| ·Saposins基因序列特性 | 第14-15页 |
| ·saposins蛋白的合成和加工 | 第15-16页 |
| ·Saposins的生物学功能 | 第16-17页 |
| ·saposins的免疫学功能 | 第17-18页 |
| ·研究背景及意义 | 第18-20页 |
| 二、实验材料与方法 | 第20-33页 |
| ·实验材料 | 第20-22页 |
| ·细胞系、菌株和质粒 | 第20页 |
| ·主要药品 | 第20页 |
| ·实验试剂 | 第20-21页 |
| ·实验所用仪器 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-33页 |
| ·细胞培养 | 第22页 |
| ·反转录PCR | 第22-24页 |
| ·Bm-sap原核表达,蛋白纯化和抗体制备 | 第24-27页 |
| ·Bm-sap蛋白在不同鳞翅目昆虫细胞中的定位 | 第27-28页 |
| ·重组杆状病毒的构建 | 第28-31页 |
| ·Bm-sap蛋白在昆虫细胞中的剪切 | 第31-32页 |
| ·质谱分析(详见Liu et al.2011) | 第32页 |
| ·溶酶体染色(详见Lyso-Tracker Red说明书,碧云天生物技术研究所) | 第32页 |
| ·细胞核染色(详见Hoechst 33342染色液说明书,碧云天生物技术研究所) | 第32-33页 |
| 三、实验结果与分析 | 第33-59页 |
| ·家蚕BM-SAPOSIN-LIKE基因的获取 | 第33-34页 |
| ·RNA的提取 | 第33页 |
| ·RT-PCR | 第33-34页 |
| ·BM-SAPOSIN基因序列特征 | 第34-36页 |
| ·BM-SAPOSIN基因的表达具有细胞特异性 | 第36-37页 |
| ·BM-SAPOSIN蛋白原核表达及纯化 | 第37-40页 |
| ·Bm-sap蛋白的原核表达 | 第37-39页 |
| ·蛋白纯化 | 第39-40页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第40页 |
| ·BM-SAPOSIN在杆状病毒BAC-TO-BAC系统中的表达 | 第40-44页 |
| ·opIE_2 promoter置换Polyhedrin promoter | 第40-42页 |
| ·pFastBac1-opIE_2-Bm-sap-v5-his和pFastBac1-opIE_2-Bm-sap-GFP重组克隆的构建 | 第42-43页 |
| ·重组杆状病毒v-opIE_2-Bm-sap-v5-his和v-opIE_2-Bm-sap-GFP的构建与鉴定 | 第43页 |
| ·重组杆状病毒粒子的产生 | 第43-44页 |
| ·BM-SAP蛋白对SL和LD细胞凋亡的影响 | 第44-45页 |
| ·BM-SAP蛋白可能下调OPIE2启动子的活性 | 第45-48页 |
| ·真核表达BM-SAP蛋白的纯化 | 第48-53页 |
| ·重组杆状病毒v-polyhedrin-Bm-sap-v5-his的构建 | 第48-49页 |
| ·重组杆状病毒v-polyhedrin-Bm-sap-GFP构建 | 第49页 |
| ·重组杆状病毒制备(方法同前) | 第49-50页 |
| ·全长Bm-sap蛋白的纯化及分子量测定 | 第50-53页 |
| ·免疫印迹检测BM-SAP蛋白在细胞中的加工剪切 | 第53-54页 |
| ·BM-SAP蛋白在胞质中定位 | 第54-55页 |
| ·杆状病毒不影响BM-SAP蛋白的定位及和溶酶体的共定位 | 第55-56页 |
| ·BM-SAP蛋白的胞外运输 | 第56-57页 |
| ·虫体中不同组织器官中BM-SAP蛋白的差异表达 | 第57-58页 |
| ·BM-SAP蛋白抗菌活性的分析 | 第58-59页 |
| 四、讨论 | 第59-61页 |
| 五、总结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 硕士期间发表论文 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
