| 博士学位论文评阅人、答辩委员会签名表 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-17页 |
| 附图索引 | 第17-18页 |
| 附表索引 | 第18-19页 |
| 英文缩略表 | 第19-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-32页 |
| ·植物体内氮的营养特征 | 第20-22页 |
| ·氮的生物学功能 | 第20页 |
| ·植物对氮的吸收和利用 | 第20-22页 |
| ·植物谷氨酰胺合成酶研究现状 | 第22-24页 |
| ·谷氨酰胺合成酶的类型 | 第22页 |
| ·谷氨酰胺合成酶的功能 | 第22-24页 |
| ·植物对氮素的利用效率 | 第24-27页 |
| ·硝酸的还原 | 第24-25页 |
| ·氨的同化 | 第25-26页 |
| ·氨基基团的相互转化 | 第26-27页 |
| ·实时荧光定量 PCR 技术 | 第27-29页 |
| ·基本原理和过程 | 第27页 |
| ·主要类型 | 第27-28页 |
| ·荧光定量的方法 | 第28页 |
| ·内参基因的选择 | 第28-29页 |
| ·苎麻概论 | 第29-30页 |
| ·苎麻基本概论 | 第29页 |
| ·苎麻饲用特性 | 第29-30页 |
| ·苎麻生长特点 | 第30页 |
| ·苎麻育种目标 | 第30页 |
| ·研究目的和意义 | 第30-32页 |
| 第二章 苎麻谷氨酰胺合成酶（GS）基因家族的克隆、序列和系统进化分析 | 第32-47页 |
| ·材料和方法 | 第32-37页 |
| ·试验材料 | 第32页 |
| ·仪器和试剂 | 第32页 |
| ·RNA 提取和 cDNA 合成 | 第32-33页 |
| ·GS 基因家族 PCR 扩增 | 第33-34页 |
| ·目的片段回收 | 第34-35页 |
| ·目的片段与载体连接 | 第35页 |
| ·目的片段转化 | 第35页 |
| ·目的片段序列测定 | 第35-36页 |
| ·BnGS2 等位基因的鉴定 | 第36页 |
| ·BnGS 基因家族序列分析 | 第36页 |
| ·BnGS 基因家族进化分析 | 第36-37页 |
| ·试验结果 | 第37-45页 |
| ·苎麻 RNA 的提取 | 第37页 |
| ·苎麻 GS 基因家族克隆 | 第37-38页 |
| ·BnGS2 等位基因鉴定 | 第38-39页 |
| ·BnGS2 等位基因序列比对 | 第39-40页 |
| ·BnGS 基因家族序列分析 | 第40-43页 |
| ·BnGS 基因系统进化分析 | 第43-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| ·BnGS 基因家族序列特征 | 第45页 |
| ·BnGS 基因系统进化 | 第45页 |
| ·苎麻和豆科 GS 基因的关系 | 第45-46页 |
| ·BnGS2 等位基因的应用 | 第46-47页 |
| 第三章 苎麻 GS 基因家族在不同部位和发育阶段的表达分析 | 第47-63页 |
| ·材料和方法 | 第47-52页 |
| ·试验材料 | 第47页 |
| ·仪器和试剂 | 第47页 |
| ·样品采集 | 第47页 |
| ·苎麻 RNA 提取 | 第47页 |
| ·cDNA 合成 | 第47-48页 |
| ·BnGS 基因 Q-PCR 引物筛选 | 第48-49页 |
| ·BnGS 基因 PCR 扩增 | 第49-50页 |
| ·BnGS 基因表达模式分析 | 第50页 |
| ·BnGS 和内参基因标准曲线制备 | 第50-52页 |
| ·数据分析 | 第52页 |
| ·试验结果 | 第52-60页 |
| ·不同部位 RNA 的提取 | 第52-53页 |
| ·BnGS 基因 Q-PCR 引物筛选 | 第53页 |
| ·BnGS 基因 PCR 扩增 | 第53-54页 |
| ·内参基因 PCR 扩增 | 第54-55页 |
| ·BnGS 和内参基因标准曲线 | 第55-57页 |
| ·BnGS 和内参基因熔解曲线 | 第57-59页 |
| ·BnGS 基因不同部位和发育阶段表达模式 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-63页 |
| ·荧光定量 PCR 的优点 | 第60-61页 |
| ·荧光定量 PCR 对引物的要求 | 第61页 |
| ·BnGS 基因家族的表达模式及功能分析 | 第61-63页 |
| 第四章 苎麻 BnGS1-2 基因超量表达载体的构建和转基因烟草植株的获取 | 第63-82页 |
| ·材料和方法 | 第63-71页 |
| ·试验材料 | 第63页 |
| ·仪器和试剂 | 第63页 |
| ·试剂的配制 | 第63-64页 |
| ·培养基的配制 | 第64-65页 |
| ·RNA 提取和 cDNA 合成 | 第65页 |
| ·pBI121 载体提取 | 第65-66页 |
| ·pBI121 载体线性化 | 第66页 |
| ·BnGS1-2 基因 PCR 扩增 | 第66页 |
| ·扩增产物纯化 | 第66页 |
| ·BnGS1-2 基因与载体重组连接 | 第66-67页 |
| ·重组载体的转化 | 第67页 |
| ·超量表达载体的提取 | 第67页 |
| ·超量表达载体的检测 | 第67页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第67-68页 |
| ·超量表达载体转化农杆菌 | 第68页 |
| ·烟草苗的培养 | 第68页 |
| ·农杆菌介导烟草遗传转化 | 第68-69页 |
| ·转基因植株 PCR 检测 | 第69-70页 |
| ·烟草 RNA 的提取 | 第70-71页 |
| ·转基因植株 Q-PCR 检测 | 第71页 |
| ·试验结果 | 第71-80页 |
| ·RNA 的提取 | 第71-72页 |
| ·pBI121 载体的提取 | 第72页 |
| ·BnGS1-2 基因 PCR 扩增 | 第72-73页 |
| ·超量表达载体的构建 | 第73-76页 |
| ·超量表达载体转化农杆菌 | 第76页 |
| ·烟草叶片转化植株再生 | 第76-77页 |
| ·烟草 DNA 的提取 | 第77-78页 |
| ·抗性植株 PCR 检测 | 第78-79页 |
| ·转基因植株 Q-PCR 检测 | 第79-80页 |
| ·讨论 | 第80-82页 |
| ·GS 基因超量表达载体构建的应用 | 第80页 |
| ·BnGS 基因超量表达载体的应用 | 第80-81页 |
| ·同源重组技术的优点 | 第81页 |
| ·转基因烟草植株的应用 | 第81-82页 |
| 第五章 超量表达 BnGS1-2 基因对转基因烟草氮代谢的影响 | 第82-93页 |
| ·材料和方法 | 第82-86页 |
| ·试验材料 | 第82页 |
| ·仪器和试剂 | 第82页 |
| ·试剂的配制 | 第82-83页 |
| ·株高、鲜重及叶片数测定 | 第83页 |
| ·水溶性蛋白含量的测定 | 第83页 |
| ·游离 NH_4~+含量的测定 | 第83页 |
| ·游离 NO_3~-含量测定 | 第83-84页 |
| ·总氮含量的测定 | 第84页 |
| ·叶绿素含量的测定 | 第84页 |
| ·GS 活性的测定 | 第84页 |
| ·牛血清白蛋白标准曲线的制备 | 第84-85页 |
| ·游离 NH_4~+标准曲线的制备 | 第85页 |
| ·游离 NO_3~-标准曲线的制备 | 第85-86页 |
| ·数据分析 | 第86页 |
| ·试验结果 | 第86-91页 |
| ·株高、鲜重及叶片数 | 第86-87页 |
| ·游离 NO_3~-的含量 | 第87页 |
| ·游离 NH_4~+的含量 | 第87-88页 |
| ·总氮含量 | 第88-89页 |
| ·水溶性蛋白含量 | 第89页 |
| ·叶绿素含量 | 第89-90页 |
| ·GS 酶活性 | 第90页 |
| ·游离 NH_4~+、NO_3~-和 BAS 标准曲线 | 第90-91页 |
| ·讨论 | 第91-93页 |
| ·BnGS 基因功能分析 | 第91-92页 |
| ·超量表达 BnGS1-2 基因烟草生长特性 | 第92页 |
| ·超量表达 BnGS1-2 基因烟草代谢特征 | 第92-93页 |
| 第六章 结论 | 第93-96页 |
| ·主要研究结果 | 第93-94页 |
| ·主要创新点 | 第94页 |
| ·今后研究的方向和目标 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 作者简历 | 第107-108页 |
