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尖孢镰刀菌小RNA发生相关Dicer,Argonaute和Rdrp基因功能研究

摘要第1-7页
Abstract第7-19页
第一章 引言第19-37页
   ·国内外研究现状第19-35页
     ·真菌中小RNA的发现第19-24页
     ·小RNA发生相关蛋白第24-33页
     ·真菌小RNA的生成及其作用机制第33-34页
     ·尖孢镰刀菌的研究概况及目前存在的问题第34-35页
   ·研究目的及意义第35页
   ·研究内容与技术路线第35-37页
     ·研究内容第35-36页
     ·技术路线第36-37页
第二章 粘团专化型尖孢镰刀菌Dicer基因功能的研究第37-69页
   ·前言第37-38页
   ·方法第38-53页
     ·寻找10种尖孢镰刀菌Dcr基因序列并进行生物信息学分析第38页
     ·RT-PCR验证Dcr基因第38-43页
     ·构建Dcr基因敲除盒第43-47页
     ·原生质体制备第47-48页
     ·原生质体转化第48-49页
     ·PCR验证Dcr基因敲除突变体第49-50页
     ·Southern杂交验证Dcr基因敲除突变体第50-52页
     ·Dcr基因突变体与野生型菌株生长表型的比较第52-53页
     ·Dcr基因突变体与野生型菌菌株对甘蓝致病力的比较第53页
   ·结果第53-66页
     ·11种尖孢镰刀菌Dcr基因的生物信息学分析结果第53-58页
     ·提取总RNA检测第58页
     ·RT-PCR检测Dcr基因结果第58页
     ·Dcr基因敲除载体构建菌液PCR结果第58-59页
     ·Dcr基因敲除盒酶切验证结果第59页
     ·Dcr基因突变体与野生型菌株分生孢子、幼殖体及原生质体的制得第59-60页
     ·潮霉素及新霉素抑菌浓度的确定第60页
     ·原生质体的再生及转化子生长情况第60-61页
     ·Dcr基因突变体的获得及PCR验证结果第61-62页
     ·Dcr基因突变体Southern杂交结果第62页
     ·Dcr基因突变体与野生型菌株的生长表型比较结果第62-66页
     ·Dcr基因突变体与野生型菌株对甘蓝致病力的比较结果第66页
   ·讨论第66-68页
   ·结论第68-69页
第三章 粘团专化型尖孢镰刀菌Argonaute 基因功能的研究第69-85页
   ·前言第69-70页
   ·方法第70-72页
     ·寻找10种尖孢镰刀菌的Ago基因序列并进行生物信息学分析第70页
     ·RT-PCR验证Ago基因第70页
     ·构建Ago基因敲除盒第70-71页
     ·原生质体制备第71页
     ·原生质转化第71页
     ·PCR验证Ago基因敲除突变体第71页
     ·Southen验证Ago基因敲除突变体第71-72页
     ·Ago基因突变体与野生型菌株生长表型的比较第72页
     ·Ago基因突变体与野生型菌菌株对甘蓝致病力的比较第72页
   ·结果第72-84页
     ·11种尖孢镰刀菌Ago基因的生物信息学分析结果第72-76页
     ·RT-PCR检测Ago基因结果第76页
     ·Ago基因敲除载体构建菌液PCR结果第76-77页
     ·Ago基因突变体的获得及PCR验证结果第77页
     ·Ago基因敲除突变体Southern杂交结果第77-78页
     ·Ago基因突变体与野生型菌株的生长表型比较结果第78-83页
     ·Ago基因突变体与野生型菌株对甘蓝致病力的比较结果第83-84页
   ·讨论第84页
   ·结论第84-85页
第四章 粘团专化型尖孢镰刀菌Rdrp基因功能的研究第85-100页
   ·前言第85-86页
   ·方法第86-88页
     ·寻找10种尖孢镰刀菌的Rdrp基因序列并进行生物信息学分析第86页
     ·RT-PCR验证Rdrp基因第86页
     ·构建Rdrp基因敲除盒第86-87页
     ·原生质体制备第87页
     ·原生质转化第87页
     ·PCR验证Rdrp基因敲除突变体第87页
     ·Southen验证Rdrp基因敲除突变体第87页
     ·Rdrp基因突变体与野生型菌株生长表型的比较第87-88页
     ·Rdrp基因突变体与野生型菌菌株对甘蓝致病力的比较第88页
   ·结果第88-99页
     ·11种尖孢镰刀菌Rdrp基因的生物信息学分析结果第88-92页
     ·RT-PCR检测Rdrp基因结果第92页
     ·Rdrp基因敲除载体构建菌液PCR结果第92-93页
     ·Rdrp基因突变体的获得及PCR验证结果第93-94页
     ·Rdrp基因敲除突变体Southern杂交结果第94页
     ·Rdrp基因突变体与野生型菌株的生长表型比较结果第94-98页
     ·Rdrp基因突变体与野生型菌株对甘蓝致病力的比较结果第98-99页
   ·讨论第99页
   ·结论第99-100页
第五章 结论与展望第100-101页
参考文献第101-112页
致谢第112-113页
个人简历第113-114页
发表文章第114页

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