| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-45页 |
| ·引言 | 第15页 |
| ·膜蛋白 | 第15-18页 |
| ·膜蛋白介绍 | 第15-16页 |
| ·膜蛋白的分类 | 第16-17页 |
| ·膜蛋白的研究现状 | 第17-18页 |
| ·无细胞蛋白合成体系 | 第18-32页 |
| ·无细胞蛋白合成体系简介 | 第18-20页 |
| ·无细胞蛋白合成体系的优势 | 第20页 |
| ·常用的无细胞蛋白合成体系 | 第20-23页 |
| ·无细胞蛋白合成体系研究进展 | 第23-28页 |
| ·无细胞蛋白合成体系的应用前景 | 第28-29页 |
| ·无细胞系统合成膜蛋白的优势 | 第29页 |
| ·无细胞系统合成膜蛋白的策略 | 第29-32页 |
| ·嗅觉受体蛋白 | 第32-35页 |
| ·嗅觉受体蛋白介绍 | 第32-34页 |
| ·嗅觉受体异源表达 | 第34页 |
| ·嗅觉受体蛋白的应用研究 | 第34-35页 |
| ·水通道蛋白 | 第35-41页 |
| ·水通道蛋白介绍 | 第35-37页 |
| ·大肠杆菌水通道蛋白AqpZ | 第37页 |
| ·目前水通道蛋白的表达情况 | 第37-38页 |
| ·AqpZ的应用研究 | 第38-41页 |
| ·无细胞体系合成异源糖蛋白的研究 | 第41-42页 |
| ·糖蛋白简介及常用表达系统 | 第41页 |
| ·无细胞体系合成异源糖蛋白的研究进展 | 第41-42页 |
| ·本工作的研究思路及拟研究内容 | 第42-45页 |
| 第二章 材料与方法 | 第45-51页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·实验菌株 | 第45页 |
| ·质粒 | 第45页 |
| ·重要试剂、工具酶及试剂盒 | 第45-46页 |
| ·培养基 | 第46页 |
| ·实验仪器 | 第46-47页 |
| ·实验及分析方法 | 第47-51页 |
| ·分子克隆实验 | 第47-48页 |
| ·DNA分子摩尔浓度测定 | 第48页 |
| ·细胞密度的测定 | 第48页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第48-49页 |
| ·Western-blot分析 | 第49页 |
| ·大肠杆菌无细胞反应体系 | 第49页 |
| ·脂质体的制备 | 第49-51页 |
| 第三章 大肠杆菌无细胞体系高效表达嗅觉受体蛋白ODR-10 | 第51-67页 |
| ·引言 | 第51页 |
| ·材料与方法 | 第51-56页 |
| ·表达载体的构建 | 第51-54页 |
| ·无细胞体系表达ODR-10 | 第54页 |
| ·两种策略提高ODR-10可溶表达 | 第54页 |
| ·无细胞体系添加去污剂可溶表达ODR-10 | 第54页 |
| ·无细胞体系添加脂质体可溶表达ODR-10 | 第54页 |
| ·SDS-PAGE和Western-blot | 第54-56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-65页 |
| ·表达载体的构建 | 第56页 |
| ·无细胞体系表达ODR-10 | 第56-58页 |
| ·筛选去污剂提高ODR-10的可溶表达水平 | 第58-59页 |
| ·去污剂浓度对ODR-10可溶表达的影响 | 第59-62页 |
| ·无细胞体系添加脂质体提高ODR-10可溶表达 | 第62-64页 |
| ·添加去污剂和脂质体两种策略表达ODR-10的比较 | 第64-65页 |
| ·本章小结 | 第65-67页 |
| 第四章 大肠杆菌无细胞体系高效表达水通道蛋白AqpZ | 第67-83页 |
| ·引言 | 第67页 |
| ·材料与方法 | 第67-73页 |
| ·无细胞表达载体pIVEX2.4c-AqpZ-His的构建 | 第67-68页 |
| ·AqpZ的纯化 | 第68-69页 |
| ·AqpZ蛋白浓度测定 | 第69页 |
| ·DOPC脂质体的制备 | 第69页 |
| ·AqpZ脂蛋白体的制备 | 第69-70页 |
| ·AqpZ功能检测 | 第70-71页 |
| ·信号肽融合表达载体的构建 | 第71-72页 |
| ·无细胞体系表达含信号肽的AqpZ | 第72页 |
| ·信号肽策略表达的AqpZ功能检测 | 第72-73页 |
| ·结果与讨论 | 第73-81页 |
| ·pIVEX2.4c-AqpZ-His表达载体的构建 | 第73页 |
| ·AqpZ表达与纯化 | 第73-74页 |
| ·AqpZ脂蛋白体的制备 | 第74-76页 |
| ·AqpZ功能的检测 | 第76-77页 |
| ·信号肽融合载体的构建 | 第77页 |
| ·信号肽融合提高AqpZ的表达水平 | 第77-78页 |
| ·添加去污剂或脂质体原位切除信号肽 | 第78-80页 |
| ·信号肽融合表达的AqpZ功能测定 | 第80-81页 |
| ·小结 | 第81-83页 |
| 第五章 水通道蛋白过滤芯片制备的初步探索 | 第83-101页 |
| ·引言 | 第83-84页 |
| ·材料与方法 | 第84-89页 |
| ·实验材料 | 第84-85页 |
| ·AAO模板镀金 | 第85页 |
| ·AAO支撑的磷脂双分子层制备 | 第85-86页 |
| ·原子力显微镜(AFM)检测 | 第86页 |
| ·电化学阻抗分析 | 第86页 |
| ·两亲性嵌段共聚物PMOXA-PDMS-PMOXA合成 | 第86-87页 |
| ·Langmuir-Blodgett单分子层制备 | 第87-88页 |
| ·LB法考察AqpZ嵌入磷脂或聚合物的能力 | 第88-89页 |
| ·不同离子对AqpZ嵌膜的影响 | 第89页 |
| ·结果与讨论 | 第89-99页 |
| ·AAO模板镀金处理 | 第89-90页 |
| ·AAO支撑的磷脂双分子层AFM检测 | 第90-91页 |
| ·AAO支撑的磷脂双分子层阻抗分析 | 第91-92页 |
| ·PMOXA-PDMS-PMOXA制备 | 第92-95页 |
| ·PMOXA-PDMS-PMOXA成膜表征 | 第95-96页 |
| ·AqpZ嵌入磷脂或聚合物能力的考察 | 第96-97页 |
| ·离子对AqpZ嵌入单分子层情况的影响 | 第97-99页 |
| ·本章小结 | 第99-101页 |
| 第六章 酵母无细胞蛋白合成体系构建 | 第101-117页 |
| ·引言 | 第101-102页 |
| ·材料与方法 | 第102-107页 |
| ·实验材料 | 第102页 |
| ·质粒构建 | 第102-103页 |
| ·酵母生长曲线测定 | 第103页 |
| ·缓冲液制备 | 第103-104页 |
| ·酵母抽提物制备 | 第104-105页 |
| ·酵母无细胞体系构建 | 第105页 |
| ·T7 RNA聚合酶制备 | 第105-106页 |
| ·载体pSITS-eGFP的通用性考察 | 第106页 |
| ·绿色荧光蛋白荧光活性测定 | 第106页 |
| ·核糖核酸酶处理抽提物 | 第106页 |
| ·线性模板制备 | 第106-107页 |
| ·结果与讨论 | 第107-115页 |
| ·质粒构建 | 第107页 |
| ·大肠杆菌、昆虫以及酵母无细胞体系中pSITS-eGFP的表达 | 第107-108页 |
| ·酵母菌无细胞抽提物制备条件的探索 | 第108-110页 |
| ·无细胞反应条件的优化 | 第110-114页 |
| ·线性模板的可行性 | 第114-115页 |
| ·本章小结 | 第115-117页 |
| 第七章 结论与展望 | 第117-121页 |
| ·结论 | 第117-119页 |
| ·展望 | 第119-121页 |
| 参考文献 | 第121-135页 |
| 作者简历 | 第135页 |
