| 致谢 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| ·几丁质酶 | 第11-14页 |
| ·几丁质酶的分类 | 第11页 |
| ·几丁质酶的结构 | 第11页 |
| ·几丁质酶的催化机制 | 第11-12页 |
| ·几丁质酶活性测定方法 | 第12页 |
| ·几丁质酶的作用 | 第12-13页 |
| ·几丁质酶基因克隆 | 第13页 |
| ·几丁质酶基因表达调控 | 第13页 |
| ·植物几丁质酶的研究 | 第13-14页 |
| ·动物几丁质酶的研究 | 第14页 |
| ·真菌几丁质酶的研究 | 第14页 |
| ·丝状真菌基因功能的研究方法 | 第14-16页 |
| ·食用菌转化方法研究 | 第16-18页 |
| ·PEG 介导转化法 | 第16页 |
| ·限制性内切酶介导整合法（REMI） | 第16页 |
| ·基因枪法 | 第16-17页 |
| ·电击法 | 第17页 |
| ·农杆菌介导转化 | 第17-18页 |
| ·平菇遗传转化的研究 | 第18-19页 |
| 第二章 平菇几丁质酶基因的克隆与生物信息学分析 | 第19-32页 |
| ·材料和方法 | 第19-22页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·菌种和质粒 | 第19页 |
| ·培养基的配制 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·仪器 | 第19-20页 |
| ·目的基因 PoChi1 的获取 | 第20-21页 |
| ·设计引物 | 第20页 |
| ·平菇总 RNA 提取 | 第20页 |
| ·cDNA 第一条链的合成 | 第20页 |
| ·平菇基因组 DNA 提取 | 第20页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增 | 第20-21页 |
| ·PCR 产物回收纯化 | 第21页 |
| ·PCR 回收产物与 pMD19 simple T 载体连接 | 第21页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第21-22页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第21页 |
| ·转化感受态细胞 | 第21-22页 |
| ·重组质粒提取及鉴定 | 第22页 |
| ·PoChi1 基因的测定 | 第22页 |
| ·平菇几丁质酶基因生物信息学分析 | 第22页 |
| ·结果与分析 | 第22-31页 |
| ·基因 PoChi1 的克隆与测序 | 第22页 |
| ·平菇几丁质酶基因生物信息学分析结果 | 第22-31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| 第三章 PoChi1 的原核表达与表达模式分析 | 第32-42页 |
| ·材料与方法 | 第32-38页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·菌种和质粒 | 第32页 |
| ·培养基配方 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·仪器 | 第32-33页 |
| ·表达载体 pEASY-pochi1 的构建 | 第33页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增 | 第33页 |
| ·PCR 产物回收纯化 | 第33页 |
| ·PCR 回收产物与 pEASY-E2 表达载体连接 | 第33页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第33页 |
| ·重组质粒的提取和鉴定 | 第33-35页 |
| ·重组质粒的提取 | 第33页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第33-35页 |
| ·表达载体 pEASY-pochi1 转化感受态细胞 | 第35页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·转化感受态细胞 | 第35页 |
| ·重组质粒提取及鉴定 | 第35页 |
| ·诱导表达 | 第35-36页 |
| ·粗酶液几丁质酶活性的测定 | 第36页 |
| ·标准曲线的制备 | 第36页 |
| ·测定粗酶液几丁质酶活性 | 第36页 |
| ·平菇几丁质酶基因表达模式分析 | 第36-38页 |
| ·培养平菇新 831 | 第36页 |
| ·提取平菇总 RNA | 第36页 |
| ·cDNA 第一条链的合成 | 第36-37页 |
| ·半定量 RT-PCR | 第37-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-41页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第39页 |
| ·重组蛋白诱导表达和 SDS-PAGE 分析 | 第39-40页 |
| ·粗酶液几丁质酶活性测定结果 | 第40-41页 |
| ·平菇几丁质酶基因 PoChi1 的表达模式分析 | 第41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 第四章 平菇 PoChi1 过量表达载体和反义表达载体的构建 | 第42-60页 |
| ·材料与方法 | 第42-49页 |
| ·材料 | 第42页 |
| ·菌种和质粒 | 第42页 |
| ·培养基配方 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·仪器 | 第42页 |
| ·引物的设计 | 第42-43页 |
| ·平菇 PoChi1 过量表达载体的构建 | 第43-47页 |
| ·平菇 gpd 启动子的克隆 | 第43-44页 |
| ·平菇 PoChi1、T35S 的克隆 | 第44-46页 |
| ·克隆载体 T-gpt 的构建 | 第46-47页 |
| ·过量表达载体 pBHg-gpt 的构建 | 第47页 |
| ·平菇 PoChi1 反义表达载体的构建 | 第47-49页 |
| ·平菇反 PoChi1 的克隆 | 第47-48页 |
| ·克隆载体 T-gfpt 的构建 | 第48页 |
| ·反义表达载体 pBHg-gfpt 的构建 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-59页 |
| ·平菇 PoChi1 过量表达载体的构建 | 第49-54页 |
| ·平菇 PoChi1 反义表达载体的构建 | 第54-59页 |
| ·反义 PoChi1 的克隆 | 第54-56页 |
| ·PoChi1 反义表达载体的构建 | 第56-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 第五章 转几丁质酶基因平菇菌株的筛选与分析 | 第60-70页 |
| ·材料与方法 | 第60-63页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·菌种和质粒 | 第60页 |
| ·培养基配方 | 第60页 |
| ·主要试剂 | 第60页 |
| ·仪器 | 第60页 |
| ·转化农杆菌 EHA105 | 第60-61页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第61页 |
| ·pBHg-gpt 和 pBHg-gfpt 转化农杆菌 EHA105 | 第61页 |
| ·平菇潮霉素筛选浓度的确定 | 第61页 |
| ·农杆菌介导转化平菇 | 第61页 |
| ·筛选与 PCR 分析 | 第61-63页 |
| ·设计引物 | 第61页 |
| ·潮霉素抗性筛选与 PCR 分析 | 第61-63页 |
| ·转化子和出发菌株培养 | 第63页 |
| ·结果与分析 | 第63-69页 |
| ·转化农杆菌检测 | 第63-64页 |
| ·潮霉素筛选浓度的确定 | 第64页 |
| ·转几丁质酶基因平菇菌株的筛选及鉴定 | 第64-68页 |
| ·转化子和出发菌株菌丝生长情况 | 第68-69页 |
| ·小结 | 第69-70页 |
| 第六章 讨论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-84页 |
| 英文摘要 | 第84-85页 |
