匍枝根霉内切葡聚糖酶基因的修饰及表达
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-25页 |
| ·选题意义 | 第15-16页 |
| ·国内外研究现状 | 第16-23页 |
| ·内切葡聚糖酶的来源及分类 | 第16-17页 |
| ·内切葡聚糖酶的结构及功能 | 第17-19页 |
| ·内切葡聚糖酶的基因工程菌 | 第19-22页 |
| ·内切葡聚糖酶的应用 | 第22-23页 |
| ·研究目的及内容 | 第23-25页 |
| ·研究目的 | 第23-24页 |
| ·研究内容 | 第24-25页 |
| 第2章 内切葡聚糖酶在大肠杆菌中的表达 | 第25-40页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·菌种及载体 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-33页 |
| ·菌丝体预处理 | 第27页 |
| ·总RNA提取 | 第27页 |
| ·mRNA分离纯化 | 第27-28页 |
| ·cDNA单链合成 | 第28页 |
| ·目的片段扩增 | 第28-29页 |
| ·目的片段纯化与测序 | 第29页 |
| ·pET28a质粒提取 | 第29-30页 |
| ·重组质粒pET28a-eg2的构建 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌感受态制备 | 第31页 |
| ·转化 | 第31-32页 |
| ·阳性克隆筛选 | 第32页 |
| ·双酶切验证 | 第32页 |
| ·发酵性能测定 | 第32-33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-39页 |
| ·总RNA的提取 | 第33-34页 |
| ·mRNA纯化 | 第34页 |
| ·单链cDNA的合成 | 第34-35页 |
| ·目的条带及测序结果 | 第35-36页 |
| ·pET28a质粒电泳图 | 第36页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第36-37页 |
| ·酶切验证结果 | 第37-38页 |
| ·发酵性能实验 | 第38-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 第3章 内切葡聚糖酶的基因修饰 | 第40-60页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·菌种 | 第40页 |
| ·培养基 | 第40页 |
| ·试剂与仪器 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-46页 |
| ·eg2基因的生物信息学分析 | 第41-42页 |
| ·关键位点确定及突变组设计 | 第42页 |
| ·eg2基因的修饰 | 第42-45页 |
| ·突变株的构建 | 第45页 |
| ·发酵性能测定 | 第45页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第45-46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-58页 |
| ·EG Ⅱ基本特性分析 | 第46-48页 |
| ·EG Ⅱ功能位点及保守结构域 | 第48页 |
| ·EG Ⅱ氨基酸序列同源分析 | 第48-50页 |
| ·EG Ⅱ结构与功能分析 | 第50-53页 |
| ·关键位点及突变组 | 第53-54页 |
| ·重叠PCR结果 | 第54-56页 |
| ·突变株发酵实验 | 第56-57页 |
| ·SDS-PAGE | 第57-58页 |
| ·小结 | 第58-60页 |
| 第4章 内切葡聚糖酶在毕赤酵母中的表达 | 第60-68页 |
| ·实验材料 | 第60-62页 |
| ·菌种及载体 | 第60页 |
| ·培养基 | 第60-61页 |
| ·试剂与仪器 | 第61-62页 |
| ·实验方法 | 第62-65页 |
| ·eg2基因的克隆 | 第62-63页 |
| ·PCR产物的纯化和回收 | 第63页 |
| ·pPIC9K质粒的提取 | 第63页 |
| ·eg2和质粒pPIC9K的酶切 | 第63页 |
| ·重组质粒pPIC9K-eg2的构建 | 第63-64页 |
| ·双酶切验证及质粒线性化 | 第64页 |
| ·毕赤酵母GS115感受态制备 | 第64页 |
| ·重组质粒的转化 | 第64-65页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第65页 |
| ·发酵性能测定 | 第65页 |
| ·结果与讨论 | 第65-67页 |
| ·eg2基因的PCR扩增 | 第65-66页 |
| ·pPIC9K质粒的提取 | 第66页 |
| ·重组质粒提取及酶切验证 | 第66-67页 |
| ·发酵性能实验 | 第67页 |
| ·小结 | 第67-68页 |
| 第5章 结论与展望 | 第68-70页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-80页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
