| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-27页 |
| ·选题意义 | 第12-13页 |
| ·胸腺肽α1(Tα1) | 第13-16页 |
| ·胸腺肽α1的来源及性质 | 第13页 |
| ·胸腺肽α1的临床应用 | 第13-15页 |
| ·胸腺肽α1制备方法简介 | 第15-16页 |
| ·Tα1在基因工程制备中的研究进展 | 第16-20页 |
| ·原核表达系统 | 第17-18页 |
| ·真核表达系统 | 第18-19页 |
| ·植物表达系统 | 第19-20页 |
| ·蛋白质的分析技术及其应用 | 第20-25页 |
| ·色谱技术 | 第21-23页 |
| ·电泳技术 | 第23-25页 |
| ·研究目的和内容 | 第25-27页 |
| ·研究目的 | 第25-26页 |
| ·研究内容 | 第26-27页 |
| 第2章 pPIC9K-Tα1表达载体的构建 | 第27-41页 |
| ·实验材料 | 第27-29页 |
| ·菌种,质粒与基因的合成 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·实验仪器与设备 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-35页 |
| ·Tα1基因的合成 | 第29页 |
| ·重组质粒pET30a-Tα1的提取 | 第29-30页 |
| ·PCR扩增胸腺肽α1(Tα1)基因 | 第30页 |
| ·PCR产物纯化试剂盒回收扩增产物 | 第30-31页 |
| ·pPIC9K质粒的提取 | 第31页 |
| ·E.coli DH5α感受态的制备 | 第31页 |
| ·PCR产物与pPIC9K质粒的酶切处理 | 第31-33页 |
| ·连接 | 第33页 |
| ·转化E.coli DH5α | 第33页 |
| ·阳性克隆筛选及鉴定 | 第33页 |
| ·毕赤酵母GS 115感受态的制备 | 第33-34页 |
| ·表达载体pPIC9K-Tα1的线性化 | 第34页 |
| ·转化毕赤酵母 | 第34页 |
| ·重组子的筛选及鉴定 | 第34-35页 |
| ·实验结果 | 第35-39页 |
| ·质粒pET30a-Tα1的提取结果 | 第35页 |
| ·Tα1的PCR扩增结果 | 第35-36页 |
| ·质粒pPIC9K的提取结果 | 第36-37页 |
| ·PCR产物与pPIC9K质粒的酶切处理结果 | 第37页 |
| ·阳性克隆的菌落PCR及质粒双酶切鉴定结果 | 第37-38页 |
| ·GS115-pPIC9K-Tα1基因组PCR鉴定结果 | 第38-39页 |
| ·结论 | 第39-41页 |
| ·实验小结 | 第39页 |
| ·实验讨论 | 第39-41页 |
| 第3章 GS115-pPIC9K-Tα1的诱导表达与纯化 | 第41-53页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·主要溶液及培养基 | 第41-42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·实验仪器与设备 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-46页 |
| ·pPIC9K-Tα1在毕赤酵母中的诱导表达 | 第42-43页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第43-44页 |
| ·生长曲线的测定 | 第44页 |
| ·pPIC9K-Tα1在毕赤酵母中表达条件的确定 | 第44-45页 |
| ·胸腺肽α1的分离纯化 | 第45页 |
| ·Bradford法测定蛋白含量 | 第45-46页 |
| ·Tα1的HPLC鉴定 | 第46页 |
| ·Tα1的质谱鉴定 | 第46页 |
| ·实验结果 | 第46-52页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第46-47页 |
| ·重组毕赤酵母的生长曲线 | 第47页 |
| ·Tα1的最佳诱导条件 | 第47-50页 |
| ·目的蛋白的纯化结果与鉴定 | 第50页 |
| ·Tα1表达量的测定 | 第50-51页 |
| ·Tα1的HPLC鉴定结果 | 第51-52页 |
| ·Tα1的质谱鉴定结果 | 第52页 |
| ·结论 | 第52-53页 |
| ·实验小结 | 第52页 |
| ·实验讨论 | 第52-53页 |
| 第4章 结论与展望 | 第53-55页 |
| ·实验结论 | 第53页 |
| ·展望 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 附录1 | 第64-66页 |
| 攻读硕士期间发表论文情况 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |