| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 縮略词表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-24页 |
| ·研究问题的由来 | 第12页 |
| ·骨骼肌发育与miRNA的相关研究 | 第12-15页 |
| ·骨骼肌发育过程中分子调控的相关研究 | 第12-13页 |
| ·miRNA与肌肉发育研究 | 第13-14页 |
| ·miRNA在骨骼肌研究中的价值 | 第14-15页 |
| ·microRNA在肌肉生长发育过程中的相关研究 | 第15-19页 |
| ·miRNA及其结构特征 | 第15页 |
| ·miRNA的生物学功能 | 第15-16页 |
| ·骨骼肌特异miRNA研究 | 第16-17页 |
| ·其他miRNA在肌肉发育中研究进展 | 第17-19页 |
| ·miR-432与候选靶基因MYOZ1的研究 | 第19-23页 |
| ·miR-432的研究 | 第19-20页 |
| ·MYOZ1基因与肌纤维类型的相关研究 | 第20-21页 |
| ·miRNA与肌纤维类型相关研究 | 第21-22页 |
| ·与肌纤维转化相关的候选基因研究 | 第22-23页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-37页 |
| ·材料 | 第24-27页 |
| ·猪组织样品 | 第24页 |
| ·菌株、细胞和载体 | 第24-25页 |
| ·试验用菌株 | 第24页 |
| ·试验用细胞系 | 第24页 |
| ·试验用载体 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·主要试剂的配制 | 第26-27页 |
| ·主要分子生物学软件及数据库 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-35页 |
| ·细胞培养 | 第27-28页 |
| ·细胞复苏及培养 | 第27-28页 |
| ·细胞传代 | 第28页 |
| ·细胞冻存 | 第28页 |
| ·细胞转染 | 第28-29页 |
| ·转染前的细胞准备 | 第28页 |
| ·用于细胞周期分析的转染 | 第28页 |
| ·用于靶向关系验证的转染 | 第28-29页 |
| ·荧光素酶检测及数据分析 | 第29页 |
| ·细胞增殖的实时监测 | 第29页 |
| ·miRNA及基因表达量分析 | 第29-31页 |
| ·细胞总RNA抽提 | 第29-30页 |
| ·反转录引物设计 | 第30页 |
| ·反转录 | 第30页 |
| ·定量PCR引物设计及条件优化 | 第30-31页 |
| ·实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,Q-PCR) | 第31页 |
| ·蛋白表达量分析 | 第31-34页 |
| ·总蛋白抽提 | 第31页 |
| ·Western blot溶液配制 | 第31-32页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第32-33页 |
| ·切胶转膜 | 第33页 |
| ·杂交 | 第33-34页 |
| ·发光检测 | 第34页 |
| ·细胞周期分析 | 第34页 |
| ·目的基因组织表达谱分析 | 第34-35页 |
| ·组织样总RNA抽提 | 第34-35页 |
| ·组织样总RNA检测 | 第35页 |
| ·组织样总RNA去基因组DNA | 第35页 |
| ·组织样总RNA反转录 | 第35页 |
| ·引物设计 | 第35-37页 |
| 3 结果 | 第37-47页 |
| ·靶基因预测及MYOZ1基因的组织表达检测 | 第37-38页 |
| ·MYOZ1基因的组织表达谱 | 第37页 |
| ·MYOZ1基因在猪三个时期中的组织表达 | 第37-38页 |
| ·miR-432与MYOZ1基因的靶向关系验证 | 第38-42页 |
| ·miR-432在C2C12细胞中的表达规律检测 | 第38-39页 |
| ·MYOZ1基因在C2C12细胞中的表达规律检测 | 第39-40页 |
| ·双荧光素酶报告基因实验鉴定miR-432和MYOZ1的互作 | 第40页 |
| ·ELISA实验进一步确立miR-432的靶基因 | 第40-41页 |
| ·Western Blot鉴定miR-432和MYOZ1的靶向互作 | 第41-42页 |
| ·免疫荧光实验鉴定miR-432靶向MYOZ1基因 | 第42页 |
| ·miR-432及MYOZ1对肌细胞增殖作用 | 第42-44页 |
| ·流式细胞仪检测分析MYOZ1基因对细胞周期影响 | 第42-43页 |
| ·xCELLigence系统检测miR-432对肌细胞增殖的影响 | 第43-44页 |
| ·miR432通过靶向MYOZ1基因影响肌纤维类型 | 第44-47页 |
| ·超表达miR-432对不同肌纤维类型maker的影响 | 第44-45页 |
| ·抑制内源miR-432表达并超表达MYOZ1对不同肌纤维类型maker的影响 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-53页 |
| ·关于MYOZ1基因在不同组织及不同时序个体组织的表达 | 第47-48页 |
| ·关于miR432与MYOZ1靶向关系验证 | 第48页 |
| ·关于miR432对肌细胞增殖的作用 | 第48-49页 |
| ·关于miR432通过靶向MYOZ1基因影响肌纤维类型 | 第49-51页 |
| ·关于miR-432靶向作用MYOZ1的应用 | 第51-53页 |
| 5 小结 | 第53-55页 |
| ·本研究得到的结果 | 第53页 |
| ·本研究的创新点与特色 | 第53-54页 |
| ·本研究的不足及下一步工作的建议 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
