| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-16页 |
| 中英文缩略词 | 第16-18页 |
| 技术路线图 | 第18-19页 |
| 引言 | 第19-22页 |
| 第一章 雷帕霉素对人神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响 | 第22-37页 |
| 前言 | 第22-24页 |
| 1、材料与方法 | 第24-25页 |
| ·细胞系 | 第24页 |
| ·实验仪器及实验试剂 | 第24-25页 |
| ·主要实验仪器与耗材 | 第24-25页 |
| ·主要实验试剂 | 第25页 |
| 2. 实验方法 | 第25-29页 |
| ·细胞培养 | 第25页 |
| ·细胞处理 | 第25-26页 |
| ·MTT检测 | 第26页 |
| ·Annexin V-FITC&PI凋亡检测 | 第26页 |
| ·蛋白样品的制备与浓度测定 | 第26-27页 |
| ·Western Blot检测 | 第27-28页 |
| ·统计分析 | 第28-29页 |
| 3. 实验结果 | 第29-32页 |
| ·雷帕霉素对神经胶质瘤U251和CHG-5细胞增殖的影响 | 第29-30页 |
| ·雷帕霉素对神经胶质瘤U251和CHG-5细胞凋亡的影响 | 第30-31页 |
| ·Western Blot检测Rapamycin对人胶质瘤U251和CHG-5细胞中mTOR活性的影响 | 第31-32页 |
| 4. 讨论 | 第32-37页 |
| 第二章 雷帕霉素通过下调糖酵解水平抑制神经胶质瘤的增殖 | 第37-82页 |
| 前言 | 第37-41页 |
| 一、雷帕霉素处理对人胶质瘤细胞糖酵解水平的影响 | 第41-49页 |
| 1、材料 | 第41-42页 |
| ·细胞系 | 第41-42页 |
| ·主要实验仪器与耗材 | 第41页 |
| ·主要实验试剂 | 第41-42页 |
| 2、实验方法 | 第42-43页 |
| ·细胞培养 | 第42页 |
| ·细胞处理 | 第42页 |
| ·葡萄糖摄取检测 | 第42-43页 |
| ·乳酸分泌检测,见上海研瑾生物科技人乳酸试剂盒说明书 | 第43页 |
| ·统计分析 | 第43页 |
| 3、实验结果 | 第43-48页 |
| ·雷帕霉素对神经胶质瘤细胞葡糖糖摄取的影响 | 第43-45页 |
| ·雷帕霉素对U251细胞葡糖糖摄取的影响 | 第43-44页 |
| ·雷帕霉素对CHG-5细胞葡糖糖摄取能力的影响 | 第44-45页 |
| ·雷帕霉素对神经胶质瘤细胞乳酸分泌的影响 | 第45-48页 |
| ·雷帕霉素对U251细胞乳酸分泌的影响 | 第45-46页 |
| ·雷帕霉素对CHG-5细胞乳酸分泌的影响 | 第46-48页 |
| 4、讨论 | 第48-49页 |
| 二、雷帕霉素处理对人胶质瘤细胞糖酵解酶的表达及活性的影响 | 第49-68页 |
| 1. 材料 | 第49-50页 |
| ·细胞系 | 第49-50页 |
| ·主要实验仪器与耗材 | 第49页 |
| ·主要实验试剂 | 第49-50页 |
| 2、实验方法 | 第50-52页 |
| ·细胞培养 | 第50页 |
| ·细胞处理 | 第50-51页 |
| ·Western Blotting | 第51页 |
| ·己糖激酶活性检测 | 第51页 |
| ·丙酮酸激酶活性检测 | 第51-52页 |
| ·乳酸脱氢酶活性检测 | 第52页 |
| ·统计分析 | 第52页 |
| 3 实验结果 | 第52-63页 |
| ·雷帕霉素对神经胶质瘤细胞己糖激酶活性的影响 | 第52-55页 |
| ·雷帕霉素对U251细胞己糖激酶活性的影响 | 第52-54页 |
| ·雷帕霉素对CHG-5细胞己糖激酶活性的影响 | 第54-55页 |
| ·雷帕霉素对神经胶质瘤细胞丙酮酸激酶活性的影响 | 第55-58页 |
| ·雷帕霉素对U251细胞丙酮酸激酶活性的影响 | 第55-56页 |
| ·雷帕霉素对CHG-5细胞丙酮酸激酶活性的影响 | 第56-58页 |
| ·雷帕霉素对神经胶质瘤细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响 | 第58-61页 |
| ·雷帕霉素对U251细胞乳酸脱氢酶活性的影响 | 第58-59页 |
| ·雷帕霉素对CHG-5细胞乳酸脱氢酶活性的影响 | 第59-61页 |
| ·雷帕霉素对神经胶质瘤细胞己糖激酶蛋白表达的影响 | 第61页 |
| ·雷帕霉素对U251细胞己糖激酶蛋白表达的影响 | 第61页 |
| ·雷帕霉素对CHG-5细胞己糖激酶蛋白表达的影响 | 第61页 |
| ·雷帕霉素对神经胶质瘤细胞丙酮酸激酶蛋白表达的影响 | 第61-62页 |
| ·雷帕霉素对U251细胞丙酮酸激酶蛋白表达的影响 | 第61-62页 |
| ·雷帕霉素对CHG-5细胞丙酮酸激酶蛋白表达的影响 | 第62页 |
| ·雷帕霉素对神经胶质瘤细胞乳酸脱氢酶蛋白表达的影响 | 第62-63页 |
| ·雷帕霉素对U251细胞乳酸脱氢酶蛋白表达的影响 | 第62-63页 |
| ·雷帕霉素对CHG-5细胞乳酸脱氢酶蛋白表达的影响 | 第63页 |
| 4、讨论 | 第63-68页 |
| 三、雷帕霉素处理对人胶质瘤细胞miR-143表达的影响 | 第68-82页 |
| 1、材料 | 第68-69页 |
| ·细胞系 | 第68页 |
| ·主要实验仪器与耗材 | 第68-69页 |
| ·主要实验试剂 | 第69页 |
| 2、实验方法 | 第69-72页 |
| ·细胞培养 | 第69页 |
| ·引物设计 | 第69-70页 |
| ·细胞处理 | 第70页 |
| ·总RNA抽提 | 第70-71页 |
| ·基因组DNA的去除 | 第71页 |
| ·miRNA-PolyA标记与RT反应 | 第71-72页 |
| ·miRNA-定量PCR检测 | 第72页 |
| ·统计分析 | 第72页 |
| 3、实验结果 | 第72-77页 |
| ·雷帕霉素对U251细胞中miR-143表达的影响 | 第72-75页 |
| ·雷帕霉素对CHG-5细胞中miR-143表达的影响 | 第75-77页 |
| 4、讨论 | 第77-82页 |
| 结论 | 第82-83页 |
| 本研究创新点 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-99页 |
| 综述 | 第99-116页 |
| 参考文献 | 第109-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第117页 |
