| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-39页 |
| ·研究问题的由来 | 第12-13页 |
| ·文献综述 | 第13-37页 |
| ·抑制素的研究进展 | 第13-20页 |
| ·黄牛和水牛INHA基因的研究现状 | 第20页 |
| ·RNAi的研究进展 | 第20-26页 |
| ·慢病毒载体的研究进展 | 第26-31页 |
| ·慢病毒载体介导RNAi技术的应用现状 | 第31-37页 |
| ·研究目的和意义 | 第37-39页 |
| 2 材料和方法 | 第39-54页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第39页 |
| ·主要仪器设备 | 第39-40页 |
| ·方法 | 第40-54页 |
| ·shRNA列设计 | 第40-42页 |
| ·pENTR/U6-INHA-shRNA vector构建和鉴定 | 第42-46页 |
| ·LV-U6-INHA-shRNA载体的构建和鉴定 | 第46-47页 |
| ·慢病毒包装 | 第47-50页 |
| ·慢病毒转染黄牛和水牛GCs及对INHA基因相对表达量的测定 | 第50-54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-64页 |
| ·PENTR/U6-INHA-sHRNA载体 | 第54-55页 |
| ·pENTR/U6-INHA-shRNA质粒基本特性 | 第54页 |
| ·pENTR/U6-INHA-shRNA质粒序列 | 第54-55页 |
| ·Lv-U6-INHA-sHRNA载体 | 第55-56页 |
| ·Lv-U6-INHA-shRNA质粒基本特性 | 第55-56页 |
| ·Lv-U6-INHA-shRNA质粒序列 | 第56页 |
| ·转染后的病毒特性 | 第56-57页 |
| ·293FTG细胞系的特性 | 第57-58页 |
| ·BGC BLASTICIDIN毒性 | 第58-59页 |
| ·病毒滴度 | 第59-64页 |
| ·cDNA的特异性 | 第60页 |
| ·c-INHA的相对表达量 | 第60-61页 |
| ·b-INHA的相对表达量 | 第61-62页 |
| ·INHA在bGC和cGC中的表达水平差异极显著 | 第62-63页 |
| ·同一病毒载体对c-INHA和b-INHA基因表达抑制率不同 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-73页 |
| ·关于PENTR/U6-INHA-sHRNA载体的构建方法 | 第64-65页 |
| ·关于Lv-U6-INHA-SHRNA载体的构建方法 | 第65-66页 |
| ·慢病毒的生产和滴度测定的讨论 | 第66-67页 |
| ·干扰机制和效果的讨论 | 第67-73页 |
| ·黄牛和水牛卵巢颗粒细胞中INHA基因表达水平不同 | 第68页 |
| ·慢病毒载体对c-IHNA基因表达的抑制效果 | 第68-70页 |
| ·慢病毒载体对b-IHNA基因表达的抑制率 | 第70页 |
| ·不同载体组合对靶基因表达抑制效果不同 | 第70-72页 |
| ·慢病毒载体与质粒DNA载体对靶基因表达的抑制效果不同 | 第72页 |
| ·慢病毒载体分别对c-INHA和b-INHA基因表达的抑制效果比较 | 第72-73页 |
| ·293FTG细胞系的建立 | 第73页 |
| 5 结论 | 第73-76页 |
| 参考文献 | 第76-87页 |
| 附录Ⅰ 载体序列比对结果 | 第87-99页 |
| 附录Ⅱ 质粒图谱 | 第99-101页 |
| 致谢 | 第101页 |
