| 目录 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 缩略语 | 第16-20页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-54页 |
| 摘要 | 第20页 |
| Abstract | 第20-21页 |
| 1 植物的耐逆性机制 | 第21-27页 |
| ·离子平衡和渗透调节 | 第21-23页 |
| ·活性氧的清除 | 第23-25页 |
| ·非生物逆境下植物基因的表达及表达产物 | 第25-27页 |
| 2 植物在非生物逆境胁迫下的细胞信号传导 | 第27-39页 |
| ·植物在非生物逆境胁迫下的细胞信号传导的一般途径 | 第27-28页 |
| ·植物非生物逆境胁迫下信号传递的网络系统 | 第28-32页 |
| ·参与植物非生物逆境胁迫信号转导过程的信号分子 | 第32-39页 |
| 3 参与非生物胁迫应答的植物转录因子 | 第39-51页 |
| ·植物转录因子的结构与特性 | 第40-41页 |
| ·参与非生物胁迫应答的植物转录因子 | 第41-51页 |
| ·转录因子在逆境抗性基因工程中的应用 | 第51页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第51-54页 |
| 第二章 ABA诱导的水稻锌指蛋白基因ZFP182和ZFP36的基因克隆、生物信息学分析以及亚细胞定位 | 第54-84页 |
| 摘要 | 第54页 |
| Abstract | 第54-55页 |
| 1 材料与方法 | 第55-64页 |
| ·供试材料 | 第55-57页 |
| ·目标基因的预测和克隆 | 第57-63页 |
| ·ZFP182和ZFP36基因及Osactin基因的荧光定量PCR | 第63页 |
| ·ZFP182和ZFP36的亚细胞定位 | 第63-64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-82页 |
| ·RNA的纯度检测 | 第64-65页 |
| ·目标基因的确定 | 第65-67页 |
| ·水稻ZFP182和ZFP36基因的序列分析 | 第67-71页 |
| ·ZFP182和ZFP36基因的TA克隆 | 第71-72页 |
| ·ZFP182和ZFP36基因的亚细胞定位 | 第72-75页 |
| ·外源ABA对水稻ZFP182和ZFP36基因表达的影响 | 第75-77页 |
| ·外源H_2O_2对水稻ZFP182和ZFP36基因表达的影响 | 第77-79页 |
| ·ABA通过内源H_2O_2调节水稻ZFP182和ZFP36基因表达 | 第79-81页 |
| ·NO参与水稻幼苗叶片ZFP182和ZFP36基因转录水平的调节 | 第81-82页 |
| 3 讨论 | 第82-84页 |
| 第三章 水稻锌指蛋白基因ZFP182和ZFP36参与ABA诱导的抗氧化防护 | 第84-108页 |
| 摘要 | 第84页 |
| Abstract | 第84-85页 |
| 1 材料与方法 | 第85-98页 |
| ·供试材料 | 第85-86页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第86-94页 |
| ·重组载体向农杆菌感受态细胞的转化 | 第94页 |
| ·ZFP182和ZFP36基因及Osactin基因的荧光定量PCR | 第94页 |
| ·水稻原生质体的分离 | 第94页 |
| ·质粒提取 | 第94页 |
| ·ZFP182和ZFP36基因dsRNA引物的设计 | 第94-95页 |
| ·ZFP182和ZFP36基因的dsRNA的体外合成 | 第95-96页 |
| ·40%PEG介导转化及ABA处理 | 第96-97页 |
| ·抗氧化酶的测定 | 第97页 |
| ·数据统计分析 | 第97-98页 |
| 2 结果与分析 | 第98-105页 |
| ·ZFP182和ZFP36基因的植物表达载体的成功构建 | 第98-100页 |
| ·转化后水稻原生质体总RNA的提取及质量检测 | 第100页 |
| ·运用RT-PCR的方法分析使ZFP182和ZFP36基因达到良好沉默效果的dsRNA的用量 | 第100-101页 |
| ·ZFP182和ZFP36过表达检测 | 第101页 |
| ·利用原生质体瞬时表达体系研究ZFP182和ZFP36基因过表达对抗氧化防护酶活性的影响 | 第101-102页 |
| ·利用原生质体瞬时表达体系研究在ABA诱导下,ZFP182和ZFP36基因沉默对抗氧化防护酶活性的影响 | 第102-103页 |
| ·转基因植株中目的基因干扰效果的鉴定 | 第103-104页 |
| ·利用转基因水稻,研究在ABA处理下,水稻叶片中细胞抗氧化防护酶APX和SOD总活性的变化 | 第104-105页 |
| 3 讨论 | 第105-108页 |
| 第四章 MAPK参与ABA对水稻幼苗ZFP182和ZFP36基因转录水平的调节 | 第108-124页 |
| 摘要 | 第108页 |
| Abstract | 第108-110页 |
| 1 材料与方法 | 第110-113页 |
| ·材料与方法 | 第110页 |
| ·水稻原生质体的分离 | 第110-111页 |
| ·OsMPK5和OsMPK1基因dsRNA引物、半定量引物以及定量引物的设计 | 第111页 |
| ·目标基因的荧光定量PCR | 第111页 |
| ·OsMPK5和OsMPK1基因的dsRNA的体外合成 | 第111-112页 |
| ·40%PEG介导转化及ABA处理 | 第112页 |
| ·OsMPK5和OsMPK1基因RT-PCR检测 | 第112-113页 |
| 2 结果与分析 | 第113-122页 |
| ·水稻中MAPK与拟南芥中MAPK同源性比较 | 第113-114页 |
| ·MAPK参与ABA对水稻幼苗ZFP182和ZFP36基因转录水平的调节 | 第114-115页 |
| ·转化后水稻原生质体总RNA的提取及质量检测 | 第115-116页 |
| ·ABA诱导水稻原生质体中ZFP36、ZFP182、OsMPK5和OsMPK1基因表达的时间进程分析 | 第116-117页 |
| ·检测OsMPK5和OsMPK1基因沉默效果 | 第117页 |
| ·利用原生质体瞬时表达体系研究在ABA诱导下,OsMPK5和OsMPK1基因沉默对ZFP182和ZFP36基因转录的影响 | 第117-119页 |
| ·利用原生质体瞬时表达体系研究在ABA诱导下,ZFP182和ZFP36基因沉默对OsMPK5和OsMPK1基因转录的影响 | 第119-120页 |
| ·利用转基因水稻,研究在ABA处理下,水稻叶片中OsMPK5和OsMPK1基因转录水平上的变化 | 第120-122页 |
| 3 讨论 | 第122-124页 |
| 第五章 OsDMI3与ZFP182和ZFP36在ABA信号通路中存在交叉对话机制 | 第124-138页 |
| 摘要 | 第124页 |
| Abstract | 第124-126页 |
| 1 材料与方法 | 第126-129页 |
| ·材料与方法 | 第126页 |
| ·水稻原生质体的分离 | 第126-127页 |
| ·OsDMI3基因dsRNA引物、半定量引物以及定量引物的设计 | 第127页 |
| ·目标基因的荧光定量PCR | 第127页 |
| ·OsDMl3基因的dsRNA的体外合成 | 第127页 |
| ·40%PEG介导转化及ABA处理 | 第127-128页 |
| ·OsDMI3基因RT-PCR检测 | 第128页 |
| ·粗酶液提取 | 第128页 |
| ·免疫沉淀 | 第128-129页 |
| ·凝胶激酶分析 | 第129页 |
| 2 结果与分析 | 第129-136页 |
| ·钙、钙调素及钙调素依赖蛋白激酶抑制剂对ABA诱导的ZFP182和ZFP36基因表达的影响 | 第129-130页 |
| ·转化后水稻原生质体总RNA的提取及质量检测 | 第130-131页 |
| ·ABA诱导水稻原生质体中OsDMI3基因表达的时间进程分析 | 第131-132页 |
| ·检测OsDMl3基因沉默效果 | 第132页 |
| ·利用原生质体瞬时表达体系研究在ABA诱导下,OsDMI3基因沉默对ZFP182和ZFP36基因转录的影响 | 第132-133页 |
| ·利用原生质体瞬时表达体系研究在ABA诱导下,ZFP182和ZFP36基因沉默对OsDMI3基因转录的影响 | 第133-134页 |
| ·利用原生质体瞬时表达体系研究在ABA诱导下,ZFP182和ZFP36基因沉默对OsDMI3激酶活性的影响 | 第134-135页 |
| ·利用转基因水稻,研究在ABA处理下,水稻叶片中OsDMI3基因转录水平上的变化 | 第135-136页 |
| 3 讨论 | 第136-138页 |
| 第六章 ZFP182和ZFP36基因可能不参与ABA信号途经中NADPH、H_2O_2和MAPK之间的正反馈调节通路 | 第138-150页 |
| 摘要 | 第138页 |
| Abstract | 第138-140页 |
| 1 材料与方法 | 第140-142页 |
| ·实验材料与处理 | 第140页 |
| ·过氧化氢的组织化学定位 | 第140页 |
| ·水稻原生质体的分离、dsRNA的合成以及转化 | 第140页 |
| ·OsrbohA-Ⅰ基因的定量引物的设计 | 第140-141页 |
| ·OsrbohA-Ⅰ基因及Osactin基因的荧光定量PCR | 第141-142页 |
| 2 结果与分析 | 第142-148页 |
| ·ABA诱导的H_2O_2组织化学定位 | 第142-143页 |
| ·水稻中OsrbohA-Ⅰ与拟南芥AtrbohD、AtrbohF以及玉米ZmrbohA-D同源性比较 | 第143-145页 |
| ·转化后水稻原生质体总RNA的提取及质量检测 | 第145页 |
| ·ABA诱导水稻原生质体中OsrbohA-Ⅰ基因表达的时间进程分析 | 第145-147页 |
| ·利用原生质体瞬时表达体系研究在ABA诱导下,ZFP182和ZFP36基因沉默对OsrbohB和OsrbohI基因转录的影响 | 第147-148页 |
| 3 讨论 | 第148-150页 |
| ·ABA诱导水稻原生质体中OsrbohB和OsrbohI基因的表达 | 第148页 |
| ·ZFP182和ZFP36基因可能不参与ABA信号途径中H_2O_2信号放大的正反馈调节机制 | 第148-150页 |
| 第七章 全文结论 | 第150-154页 |
| 1 研究小结 | 第150-152页 |
| ·ZFP182和ZFP36基因的克隆、生物学分析以及亚细胞定位 | 第150页 |
| ·水稻锌指蛋白基因ZFP182和ZFP36参与ABA诱导的抗氧化防护 | 第150页 |
| ·MAPK参与ABA对ZFP182和ZFP36基因转录水平的调节 | 第150-151页 |
| ·OsDMI3与ZFP182和ZFP36在ABA信号通路中存在交叉对话机制 | 第151页 |
| ·ZFP182和ZFP36基因可能不参与ABA信号途经中NADPH、H_2O_2和MAPK之间的正反馈调节通路 | 第151-152页 |
| 2 创新之处 | 第152页 |
| 3 存在问题与展望 | 第152-154页 |
| 参考文献 | 第154-178页 |
| 致谢 | 第178-180页 |
| 攻读博士期间发表与投送的学术论文 | 第180-182页 |
| 附录 | 第182-183页 |
