| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-19页 |
| 第一章 前言 | 第19-39页 |
| 第一节 miRNA的产生及功能 | 第19-24页 |
| 一、 miRNA的简介及产生 | 第19-20页 |
| 二、 miRNA的功能 | 第20-24页 |
| 第二节 miRNA的表达谱检测 | 第24-30页 |
| 一、 miRNA表达谱检测方法概述 | 第24-25页 |
| 二、 miRNA的结构特点 | 第25-26页 |
| 三、 miRNA的表达谱检测方法 | 第26-30页 |
| 第三节 miRNA的表达与活性关系 | 第30-34页 |
| 一、 miRNA活性与miRNA表达水平的关系 | 第30-31页 |
| 二、 miRNA活性影响因素分析 | 第31-34页 |
| 第四节 miRNA活性水平检测方法 | 第34-36页 |
| 一、 间接法 | 第34页 |
| 二、 直接法 | 第34-36页 |
| 第五节 论文设计 | 第36-39页 |
| 一、 立题依据 | 第36页 |
| 二、 论文目标 | 第36-37页 |
| 三、 设计思路 | 第37-38页 |
| 四、 实验设计 | 第38-39页 |
| 第二章 一种高通量活细胞miRNA活性谱检测方法的建立 | 第39-72页 |
| 一、 材料、试剂和仪器 | 第39-43页 |
| 1、 质粒和菌株 | 第39页 |
| 2、 细胞和病毒 | 第39页 |
| 3、 常用酶及试剂盒 | 第39-40页 |
| 4、 主要试剂 | 第40页 |
| 5、 主要缓冲液 | 第40-42页 |
| 6、 细菌培养基 | 第42页 |
| 7、 主要仪器与设备 | 第42-43页 |
| 二、 实验方法 | 第43-48页 |
| 1、 miRNA Dsensor载体的构建 | 第43页 |
| 2、 Control Dsensor和miRNA Dsensor的大量制备 | 第43-44页 |
| 3、 96 孔板细胞转染实验 | 第44页 |
| 4、 荧光素酶表达活性测定 | 第44页 |
| 5、 miRNA Asensor的制备 | 第44-45页 |
| 6、 SDS-PAGE检测miRNA Asensor | 第45页 |
| 7、 DNA斑点杂交测定miRNA Asensor基因组滴度 | 第45-46页 |
| 8、 miRNA Asensor的感染活性测定 | 第46页 |
| 9、 miRNA Asensor array的制备 | 第46页 |
| 10、 miRNA Asensor 转导系数测定 | 第46-47页 |
| 11、miRNA 活性计算方法 | 第47页 |
| 12、HEK293细胞中miRNA活性测定 | 第47页 |
| 13、qRT-PCR法测定HEK293细胞中miRNA相对表达水平 | 第47页 |
| 14、数据分析 | 第47-48页 |
| 三、 结果 | 第48-68页 |
| 1、 miRNA Asensor array的制备流程及应用过程 | 第48页 |
| 2、 miRNA Dsensor的构建及功能验证 | 第48-57页 |
| 3、 miRNA Asensor array的制备 | 第57-59页 |
| 4、 miRNA Asensor array测定miRNA活性的影响因素分析 | 第59-63页 |
| 5、 转导系数（TC）的计算及miRNA活性表示方法的确定 | 第63-66页 |
| 6、 细胞中miRNA活性与其表达水平的比较 | 第66-68页 |
| 四、 讨论 | 第68-70页 |
| 五、 小结 | 第70-72页 |
| 第三章 高通量活细胞miRNA活性谱检测方法的应用 | 第72-105页 |
| 第一节 活细胞miRNA活性谱的扫描及特征性分析 | 第72-80页 |
| 一、 材料、试剂和仪器 | 第72-73页 |
| 二、 实验方法 | 第73页 |
| 三、 结果 | 第73-79页 |
| 四、 讨论 | 第79-80页 |
| 第二节 病毒癌基因对细胞miRNA活性影响 | 第80-92页 |
| 一、 材料、试剂和仪器 | 第80-82页 |
| 二、 实验方法 | 第82-83页 |
| 三、 结果 | 第83-91页 |
| 四、 讨论 | 第91-92页 |
| 第三节 细胞分化过程中miRNA活性变化监测 | 第92-96页 |
| 一、 材料、试剂和仪器 | 第92页 |
| 二、 实验方法 | 第92-93页 |
| 三、 结果 | 第93-95页 |
| 四、 讨论 | 第95-96页 |
| 第四节 miR-206在BHK21细胞中特征性高活性的发现 | 第96-104页 |
| 一、 材料、试剂和仪器 | 第96-97页 |
| 二、 实验方法 | 第97-99页 |
| 三、 结果 | 第99-103页 |
| 四、 讨论 | 第103-104页 |
| 小结 | 第104-105页 |
| 第四章 miR-21 在小鼠正常肝脏中高活性 | 第105-113页 |
| 一、 材料、试剂和仪器 | 第105-106页 |
| 1、 动物 | 第105页 |
| 2、 质粒和菌株 | 第105页 |
| 3、 试剂 | 第105页 |
| 4、 仪器 | 第105-106页 |
| 二、 实验方法 | 第106-107页 |
| 1、 Psensor载体构建 | 第106页 |
| 2、 不同器官Fluc表达测定 | 第106页 |
| 3、 小鼠正常肝脏中miR-21活性测定 | 第106-107页 |
| 4、 qRT-PCR法测定小鼠正常肝脏中miR-21表达水平 | 第107页 |
| 三、 结果 | 第107-111页 |
| 1、 体内miRNA活性检测传感器载体的构建 | 第107-108页 |
| 2、 水动力注射法特异性转导肝脏 | 第108-109页 |
| 3、 小鼠正常肝脏中miR-21活性测定 | 第109-110页 |
| 4、 小鼠正常肝脏中miR-21表达水平测定 | 第110-111页 |
| 四、 讨论 | 第111-112页 |
| 六、 小结 | 第112-113页 |
| 结论 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-124页 |
| 个人简历 | 第124-125页 |
| 致谢 | 第125页 |
