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拟南芥AGPase基因转化玉米的研究

中文摘要第1-7页
Abstract第7-15页
英文缩略表第15-16页
第一章 文献综述第16-32页
   ·淀粉概述第16-18页
     ·淀粉简介第16-18页
     ·淀粉的生物合成第18页
   ·AGPase 概述第18-21页
     ·AGPase 简介第18-19页
     ·AGPase 及其基因的研究进展第19-21页
     ·AGPase 基因的命名第21页
     ·拟南芥 AGPase 基因的简介第21页
   ·启动子简介第21-23页
     ·水稻醇溶蛋白启动子 RP5 简介第22页
     ·大麦醇溶蛋白启动子 D-hordein 简介第22-23页
   ·遗传转化方法第23-27页
     ·农杆菌介导法第23-25页
     ·花粉管通道法第25-27页
   ·玉米遗传转化受体系统的研究进展第27-28页
   ·利用 GUS 组织化学染色法对玉米的遗传转化体系进行优化第28-29页
   ·转基因植株的检测方法第29-30页
     ·基于整合水平所进行的检测第29页
     ·基于转录水平所进行的检测第29-30页
     ·基于表达水平所进行的检测第30页
   ·研究的目的和意义第30-32页
第二章 目的基因的克隆与载体构建第32-47页
   ·实验材料第32-34页
     ·植物材料及载体和菌株第32-34页
   ·实验药品、试剂及仪器设备第34-35页
     ·实验药品第34页
     ·实验使用的引物第34-35页
     ·实验所需培养基及试剂第35页
     ·实验仪器第35页
   ·实验方法第35-42页
     ·玉米基因组 DNA 提取和纯化第35-36页
     ·拟南芥叶片总 RNA 的提取第36-37页
     ·cDNA 第一链的合成第37页
     ·目的基因克隆第37-38页
     ·目的片段回收第38页
     ·目的片段与克隆载体连接第38-39页
     ·大肠杆菌 TOP10 感受态细胞的制备(CaCl2 法)第39页
     ·重组质粒的转化大肠杆菌感受态细胞第39-40页
     ·质粒 DNA 的提取第40页
     ·重组质粒的 PCR 鉴定第40-41页
     ·重组质粒的双酶切鉴定第41页
     ·测序第41-42页
     ·植物表达载体构建第42页
   ·结果第42-46页
     ·RNA 的提取及 cDNA 第一链的合成第42-43页
     ·拟南芥 AGPase 小亚基基因的克隆第43-45页
     ·植物表达载体的构建第45-46页
   ·小结第46-47页
第三章 农杆菌介导的玉米愈伤组织遗传转化第47-67页
   ·实验材料第47页
     ·菌株及植物表达载体第47页
     ·受体材料第47页
   ·实验药品、试剂及仪器设备第47-48页
     ·实验药品及试剂第47-48页
     ·仪器与设备第48页
   ·实验方法第48-52页
     ·以愈伤组织为受体的遗传转化体系的优化第48-49页
     ·石蜡切片制片法第49-50页
     ·农杆菌侵染第50-52页
     ·GUS 组织化学染色法第52页
   ·实验结果第52-60页
     ·以愈伤组织为受体的遗传转化体系的优化第52-59页
     ·石蜡切片组织观察第59页
     ·农杆菌侵染第59-60页
   ·讨论第60-66页
     ·遗传受体系统优化的影响因素第60-62页
     ·遗传转化体系的影响因素第62-66页
   ·小结第66-67页
第四章 农杆菌介导的玉米茎节遗传转化第67-84页
   ·实验材料第67页
     ·菌株及植物表达载体第67页
     ·受体材料第67页
   ·实验药品、试剂及仪器设备第67-68页
     ·实验药品及试剂第67-68页
     ·仪器与设备第68页
   ·实验方法第68-75页
     ·以玉米茎节为受体的遗传转化体系的优化第68-69页
     ·农杆菌侵染第69-70页
     ·GUS 组织化学染色法第70页
     ·转化再生苗的 PCR 检测第70-71页
     ·转化再生苗的 Bar 基因试纸条检测第71页
     ·转化再生苗的 Southern blotting 检测第71-75页
   ·实验结果第75-82页
     ·以玉米茎节为受体的遗传转化体系的优化第75-78页
     ·农杆菌侵染玉米茎节第78-79页
     ·PCR 检测第79-80页
     ·Bar 基因试纸条检测第80-82页
     ·Southern blotting 检测第82页
   ·讨论第82-83页
     ·种子消毒条件对萌发率的影响第82页
     ·玉米茎节预培养时间对转化率的影响第82-83页
   ·小结第83-84页
第5章 花粉管通道法转化玉米的研究第84-96页
   ·实验材料第84-85页
     ·植物材料第84页
     ·表达载体第84页
     ·药品及试剂第84-85页
     ·PCR 检测引物第85页
   ·仪器设备第85页
   ·实验方法第85-87页
     ·重组质粒 DNA 的准备第85页
     ·重组质粒 DNA 的导入第85-86页
     ·部分 T0代籽粒的胚乳 PCR 检测第86页
     ·T0代转化植株的抗性筛选与 PCR 检测第86-87页
     ·外源基因在 T1和 T2代中的跟踪检测第87页
     ·转基因植株生物学性状的考察第87页
     ·转基因植株籽粒淀粉含量的测定第87页
   ·实验结果第87-94页
     ·各世代转化材料的获得第87-89页
     ·T0 代籽粒胚乳 PCR 检测第89页
     ·转化植株的抗性筛选第89-90页
     ·转化植株的分子检测第90-92页
     ·转化植株的生物学性状考察第92-93页
     ·转基因植株籽粒淀粉含量的测定第93-94页
   ·讨论第94-95页
   ·小结第95-96页
第6章 全文结论第96-97页
参考文献第97-110页
附录 试剂配方第110-113页
作者简介第113-114页
致谢第114页

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