中文摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-15页 |
英文缩略表 | 第15-16页 |
第一章 文献综述 | 第16-32页 |
·淀粉概述 | 第16-18页 |
·淀粉简介 | 第16-18页 |
·淀粉的生物合成 | 第18页 |
·AGPase 概述 | 第18-21页 |
·AGPase 简介 | 第18-19页 |
·AGPase 及其基因的研究进展 | 第19-21页 |
·AGPase 基因的命名 | 第21页 |
·拟南芥 AGPase 基因的简介 | 第21页 |
·启动子简介 | 第21-23页 |
·水稻醇溶蛋白启动子 RP5 简介 | 第22页 |
·大麦醇溶蛋白启动子 D-hordein 简介 | 第22-23页 |
·遗传转化方法 | 第23-27页 |
·农杆菌介导法 | 第23-25页 |
·花粉管通道法 | 第25-27页 |
·玉米遗传转化受体系统的研究进展 | 第27-28页 |
·利用 GUS 组织化学染色法对玉米的遗传转化体系进行优化 | 第28-29页 |
·转基因植株的检测方法 | 第29-30页 |
·基于整合水平所进行的检测 | 第29页 |
·基于转录水平所进行的检测 | 第29-30页 |
·基于表达水平所进行的检测 | 第30页 |
·研究的目的和意义 | 第30-32页 |
第二章 目的基因的克隆与载体构建 | 第32-47页 |
·实验材料 | 第32-34页 |
·植物材料及载体和菌株 | 第32-34页 |
·实验药品、试剂及仪器设备 | 第34-35页 |
·实验药品 | 第34页 |
·实验使用的引物 | 第34-35页 |
·实验所需培养基及试剂 | 第35页 |
·实验仪器 | 第35页 |
·实验方法 | 第35-42页 |
·玉米基因组 DNA 提取和纯化 | 第35-36页 |
·拟南芥叶片总 RNA 的提取 | 第36-37页 |
·cDNA 第一链的合成 | 第37页 |
·目的基因克隆 | 第37-38页 |
·目的片段回收 | 第38页 |
·目的片段与克隆载体连接 | 第38-39页 |
·大肠杆菌 TOP10 感受态细胞的制备(CaCl2 法) | 第39页 |
·重组质粒的转化大肠杆菌感受态细胞 | 第39-40页 |
·质粒 DNA 的提取 | 第40页 |
·重组质粒的 PCR 鉴定 | 第40-41页 |
·重组质粒的双酶切鉴定 | 第41页 |
·测序 | 第41-42页 |
·植物表达载体构建 | 第42页 |
·结果 | 第42-46页 |
·RNA 的提取及 cDNA 第一链的合成 | 第42-43页 |
·拟南芥 AGPase 小亚基基因的克隆 | 第43-45页 |
·植物表达载体的构建 | 第45-46页 |
·小结 | 第46-47页 |
第三章 农杆菌介导的玉米愈伤组织遗传转化 | 第47-67页 |
·实验材料 | 第47页 |
·菌株及植物表达载体 | 第47页 |
·受体材料 | 第47页 |
·实验药品、试剂及仪器设备 | 第47-48页 |
·实验药品及试剂 | 第47-48页 |
·仪器与设备 | 第48页 |
·实验方法 | 第48-52页 |
·以愈伤组织为受体的遗传转化体系的优化 | 第48-49页 |
·石蜡切片制片法 | 第49-50页 |
·农杆菌侵染 | 第50-52页 |
·GUS 组织化学染色法 | 第52页 |
·实验结果 | 第52-60页 |
·以愈伤组织为受体的遗传转化体系的优化 | 第52-59页 |
·石蜡切片组织观察 | 第59页 |
·农杆菌侵染 | 第59-60页 |
·讨论 | 第60-66页 |
·遗传受体系统优化的影响因素 | 第60-62页 |
·遗传转化体系的影响因素 | 第62-66页 |
·小结 | 第66-67页 |
第四章 农杆菌介导的玉米茎节遗传转化 | 第67-84页 |
·实验材料 | 第67页 |
·菌株及植物表达载体 | 第67页 |
·受体材料 | 第67页 |
·实验药品、试剂及仪器设备 | 第67-68页 |
·实验药品及试剂 | 第67-68页 |
·仪器与设备 | 第68页 |
·实验方法 | 第68-75页 |
·以玉米茎节为受体的遗传转化体系的优化 | 第68-69页 |
·农杆菌侵染 | 第69-70页 |
·GUS 组织化学染色法 | 第70页 |
·转化再生苗的 PCR 检测 | 第70-71页 |
·转化再生苗的 Bar 基因试纸条检测 | 第71页 |
·转化再生苗的 Southern blotting 检测 | 第71-75页 |
·实验结果 | 第75-82页 |
·以玉米茎节为受体的遗传转化体系的优化 | 第75-78页 |
·农杆菌侵染玉米茎节 | 第78-79页 |
·PCR 检测 | 第79-80页 |
·Bar 基因试纸条检测 | 第80-82页 |
·Southern blotting 检测 | 第82页 |
·讨论 | 第82-83页 |
·种子消毒条件对萌发率的影响 | 第82页 |
·玉米茎节预培养时间对转化率的影响 | 第82-83页 |
·小结 | 第83-84页 |
第5章 花粉管通道法转化玉米的研究 | 第84-96页 |
·实验材料 | 第84-85页 |
·植物材料 | 第84页 |
·表达载体 | 第84页 |
·药品及试剂 | 第84-85页 |
·PCR 检测引物 | 第85页 |
·仪器设备 | 第85页 |
·实验方法 | 第85-87页 |
·重组质粒 DNA 的准备 | 第85页 |
·重组质粒 DNA 的导入 | 第85-86页 |
·部分 T0代籽粒的胚乳 PCR 检测 | 第86页 |
·T0代转化植株的抗性筛选与 PCR 检测 | 第86-87页 |
·外源基因在 T1和 T2代中的跟踪检测 | 第87页 |
·转基因植株生物学性状的考察 | 第87页 |
·转基因植株籽粒淀粉含量的测定 | 第87页 |
·实验结果 | 第87-94页 |
·各世代转化材料的获得 | 第87-89页 |
·T0 代籽粒胚乳 PCR 检测 | 第89页 |
·转化植株的抗性筛选 | 第89-90页 |
·转化植株的分子检测 | 第90-92页 |
·转化植株的生物学性状考察 | 第92-93页 |
·转基因植株籽粒淀粉含量的测定 | 第93-94页 |
·讨论 | 第94-95页 |
·小结 | 第95-96页 |
第6章 全文结论 | 第96-97页 |
参考文献 | 第97-110页 |
附录 试剂配方 | 第110-113页 |
作者简介 | 第113-114页 |
致谢 | 第114页 |