| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 一 文献综述 | 第11-23页 |
| 1 叶绿体形成研究进展 | 第11-14页 |
| ·叶绿体的结构 | 第11-12页 |
| ·水稻叶绿体发育过程研究现状 | 第12-13页 |
| ·水稻叶绿体发育与叶片黄化研究现状 | 第13-14页 |
| 2 DCL(Defective Chloroplasts and Leaves)基因的研究进展 | 第14-15页 |
| 3 植物吲哚-3-甘油磷酸合酶研究现状 | 第15-17页 |
| 4 RNAi技术原理及应用 | 第17-21页 |
| ·RNAi的分子作用机理 | 第18-19页 |
| ·RNAi运用于植物研究 | 第19-21页 |
| ·用于植物功能基因的研究与分析 | 第19-20页 |
| ·在抗病性研究中的应用 | 第20-21页 |
| ·在作物遗传育种改良中的作用 | 第21页 |
| 5 本论文研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 二 材料与方法 | 第23-38页 |
| 1 实验材料 | 第23-25页 |
| ·实验水稻品种 | 第23页 |
| ·菌株与载体 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23-24页 |
| ·培养基成分 | 第24-25页 |
| ·细菌培养基成分 | 第24页 |
| ·用于水稻组织培养的培养基 | 第24-25页 |
| 2 试验方法 | 第25-38页 |
| ·RNAi载体的构建及检测 | 第25-33页 |
| ·水稻材料RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第26-27页 |
| ·数据库搜索基因的表达谱 | 第27页 |
| ·基因干涉片段扩增 | 第27-28页 |
| ·干涉引物设计 | 第27-28页 |
| ·PCR产物的纯化和回收 | 第28页 |
| ·干涉片段与克隆载体的连接 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第29页 |
| ·质粒DNA转化大肠杆菌 | 第29-30页 |
| ·质粒的提取 | 第30-31页 |
| ·DNA测序及核苷酸序列分析 | 第31页 |
| ·干涉载体的构建及检测 | 第31-33页 |
| ·水稻OsDCL1基因RNAi载体的构建及检测 | 第31-32页 |
| ·OsIGSl,OsIGS2,OsIGS3以及OsIGS123 RNAi载体的构建及检测 | 第32-33页 |
| ·农杆菌介导RNAi表达载体的遗传转化 | 第33-38页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第33-34页 |
| ·质粒DNA转化农杆菌 | 第34页 |
| ·农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第34-35页 |
| ·愈伤组织的诱导 | 第34页 |
| ·农杆菌的活化 | 第34-35页 |
| ·农杆菌介导的愈伤转化与共培养 | 第35页 |
| ·转基因植株的分子生物学检测 | 第35-38页 |
| ·植物基因组DNA的提取 | 第35-36页 |
| ·转化植株的PCR检测 | 第36-37页 |
| ·转化植株的qPCR检测 | 第37-38页 |
| 三 结果与分析 | 第38-53页 |
| 1 OsDCLs和OsIGSs的表达谱及序列分析 | 第38-43页 |
| ·表达谱分析 | 第38-39页 |
| ·RNA及氨基酸序列分析 | 第39-43页 |
| ·OsDCLs序列分析 | 第39-41页 |
| ·OsIGSs序列分析 | 第41-43页 |
| 2 RNAi载体的构建 | 第43-48页 |
| ·OsDCL1载体的构建 | 第43-46页 |
| ·RNA的提取和检测 | 第43-44页 |
| ·OsDCL1 RNA干涉片段扩增 | 第44页 |
| ·OsDCLl干涉片段与pEASY-T连接后的PCR阳性菌落检测 | 第44-45页 |
| ·酶切检测pCAMBIA301-OsDCL1RNAi-sense阳性克隆 | 第45-46页 |
| ·酶切检测质粒pCAMBIA301-OsDCL1 RNAi | 第46页 |
| ·OsIGS1,OsIGS1,OsIGS3和OsIGSl23 RNA干涉载体的构建 | 第46-48页 |
| ·OsIGS1,OsIGS1,OsIGS3和OsIGS123 RNA干涉片段扩增 | 第46-47页 |
| ·PCR检测阳性克隆 | 第47-48页 |
| ·酶切检测载体DANDA-OsIGSs-RNAi | 第48页 |
| 3 农杆菌介导RNA干涉载体的转化 | 第48-53页 |
| ·转化农杆菌的鉴定 | 第48-49页 |
| ·转基因水稻植株的获得 | 第49-50页 |
| ·T0代转基因的植株的PCR阳性检测 | 第50-51页 |
| ·T0代转基因植株的表型观察 | 第51页 |
| ·qPCR检测T0代转基因植株OsDCL1的表达量 | 第51-52页 |
| ·PCR检测OsDCL1RNA涉T1代转基因植株 | 第52-53页 |
| 四 讨论 | 第53-56页 |
| 1 水稻中OsDCLs基因与叶绿体发育 | 第53-54页 |
| 2 水稻中OsIGSs基因与水稻发育 | 第54页 |
| 3 后续研究设想 | 第54-56页 |
| ·绿色荧光(GFP)融合蛋白的亚细胞定位 | 第54-55页 |
| ·组织学电镜观察 | 第55页 |
| ·激素测定 | 第55页 |
| ·转录组分析 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
