| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 符号说明 | 第11-17页 |
| 第一章 研究综述 | 第17-35页 |
| 第一节 罗非鱼链球菌病的研究综述 | 第17-26页 |
| 1 病原学 | 第17-19页 |
| ·分类与分布 | 第17-18页 |
| ·生物学特征 | 第18页 |
| ·分离鉴定 | 第18-19页 |
| 2 传播途径 | 第19页 |
| 3 致病性与致病机制 | 第19-20页 |
| ·临床症状 | 第19页 |
| ·致病机理 | 第19-20页 |
| 4 环境诱因 | 第20-22页 |
| ·水温 | 第20页 |
| ·氧气 | 第20-21页 |
| ·氨浓度 | 第21页 |
| ·硝酸盐和亚硝酸盐 | 第21页 |
| ·pH值 | 第21-22页 |
| 5 诊断 | 第22-23页 |
| ·常规诊断 | 第22页 |
| ·金标准诊断 | 第22-23页 |
| ·分子生物学技术诊断 | 第23页 |
| 6 防控措施 | 第23-25页 |
| ·加强饲养管理 | 第23页 |
| ·化药治疗 | 第23-24页 |
| ·免疫接种 | 第24-25页 |
| 7 小结 | 第25-26页 |
| 第二节 无乳链球菌荚膜多糖合成基因研究进展 | 第26-35页 |
| 1 CPS基因的命名和序列特点 | 第26-28页 |
| ·cps基因的命名 | 第26-27页 |
| ·cps基因序列的特点 | 第27-28页 |
| 2 CPS基因的转录调节机制 | 第28页 |
| ·RogB的调节机制 | 第28页 |
| ·CovR/S的调节机制 | 第28页 |
| ·通适型调节机制 | 第28页 |
| 3 CPS基因编码蛋白及其生物功能 | 第28-31页 |
| ·糖基转移酶类 | 第29页 |
| ·糖基聚合酶类 | 第29-31页 |
| ·其他 | 第31页 |
| 4 CPS基因与荚膜多糖合成 | 第31-32页 |
| ·荚膜多糖的合成启动 | 第31页 |
| ·荚膜多糖的聚合和修饰 | 第31-32页 |
| ·荚膜多糖的运输和形成 | 第32页 |
| 5 CPS基因与血清分型 | 第32-33页 |
| ·基于cps基因的血清分型与传统血清分型方法的比较 | 第32-33页 |
| ·基于cps基因的血清分型的应用前景 | 第33页 |
| 6 与CPS基因相关的突变株的构建及生物特性 | 第33-34页 |
| ·基于转座子突变技术的突变株的构建 | 第33-34页 |
| ·基于同源重组技术的突变株的构建 | 第34页 |
| 7 小结 | 第34-35页 |
| 第二章 研究目的与意义 | 第35-36页 |
| 第三章 罗非鱼源无乳链球菌的分离、鉴定和生物学特性研究 | 第36-58页 |
| 1 试验材料 | 第36-37页 |
| ·试验动物 | 第36页 |
| ·主要仪器 | 第36-37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| 2 试验方法 | 第37-44页 |
| ·病样采集 | 第37-38页 |
| ·病原检测 | 第38页 |
| ·菌株鉴定 | 第38-40页 |
| ·回归试验 | 第40页 |
| ·药物敏感性试验 | 第40页 |
| ·血清分型 | 第40-42页 |
| ·LD_(50)的测定 | 第42-43页 |
| ·胞外产物蛋白含量和胞外酶活性检测 | 第43-44页 |
| 3 结果 | 第44-51页 |
| ·寄生虫性病原检测结果 | 第44页 |
| ·细菌性病原检测结果 | 第44-45页 |
| ·病毒性病原检测结果 | 第45-46页 |
| ·菌株鉴定 | 第46-48页 |
| ·回归试验结果 | 第48页 |
| ·药物敏感性试验结果 | 第48-49页 |
| ·血清分型结果 | 第49-50页 |
| ·LD_(50)的测定结果 | 第50页 |
| ·胞外产物蛋白含量和胞外酶活性检测理化特性检测结果 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-57页 |
| ·样品收集方法对研究准确性的影响 | 第51-52页 |
| ·无乳链球菌的鉴定方法 | 第52-53页 |
| ·无乳链球菌鉴定方法的准确性和可靠性 | 第53-54页 |
| ·无乳链球菌的耐药性分析 | 第54页 |
| ·血清型鉴定方法的比较 | 第54-55页 |
| ·菌株LD_(50)测定与菌株毒力评估 | 第55-56页 |
| ·胞外产物理化特性检测的意义 | 第56页 |
| ·无乳链球菌病的综合防控 | 第56-57页 |
| 5 小结 | 第57-58页 |
| 第四章 无乳链球菌三重PCR快诊方法的建立与应用 | 第58-75页 |
| 1 试验材料 | 第58-59页 |
| ·试验菌株 | 第58-59页 |
| ·主要仪器 | 第59页 |
| ·主要试剂 | 第59页 |
| 2 试验方法 | 第59-65页 |
| ·PCR引物设计与合成 | 第59-60页 |
| ·无乳链球菌DNA的提取 | 第60页 |
| ·序列的PCR扩增和鉴定 | 第60-61页 |
| ·引物组合和温度条件优化 | 第61-63页 |
| ·特异性试验 | 第63页 |
| ·敏感性试验 | 第63-64页 |
| ·Mg~(2+)浓度优化 | 第64页 |
| ·重复性试验 | 第64页 |
| ·应用 | 第64-65页 |
| 3 结果 | 第65-70页 |
| ·三对特异性引物的扩增结果 | 第65-66页 |
| ·序列的测定和比对 | 第66页 |
| ·引物组合和温度条件优化 | 第66页 |
| ·Mg~(2+)浓度优化 | 第66-67页 |
| ·特异性检测 | 第67-68页 |
| ·敏感性检测 | 第68-69页 |
| ·重复性 | 第69-70页 |
| ·应用 | 第70页 |
| 4 讨论 | 第70-74页 |
| ·三重PCR检测方法的现实意义 | 第70-71页 |
| ·特异性和敏感性问题 | 第71-72页 |
| ·三重PCR反应体系参数优化 | 第72-73页 |
| ·三重PCR反应条件优化 | 第73页 |
| ·三重PCR的应用 | 第73-74页 |
| 5 小结 | 第74-75页 |
| 第五章 无乳链球菌对罗非鱼的病理损伤研究 | 第75-103页 |
| 1 试验材料 | 第75-76页 |
| ·试验菌株 | 第75页 |
| ·试验动物 | 第75页 |
| ·试验仪器 | 第75页 |
| ·主要试剂 | 第75-76页 |
| 2 试验方法 | 第76-77页 |
| ·自然发病罗非鱼病理损伤 | 第76页 |
| ·人工感染发病罗非鱼病理损伤 | 第76-77页 |
| 3 结果 | 第77-80页 |
| ·临床症状 | 第77页 |
| ·组织病理损伤 | 第77-79页 |
| ·超微病理学损伤 | 第79-80页 |
| 4 讨论 | 第80-83页 |
| ·临床症状辨析 | 第80-81页 |
| ·组织病理损伤辨析 | 第81-82页 |
| ·致病机制探讨 | 第82-83页 |
| 5 小结 | 第83-84页 |
| 图版Ⅰ 发病罗非鱼的临床症状 | 第84-87页 |
| 图版Ⅱ 发病罗非鱼的组织病理形态 | 第87-99页 |
| 图版Ⅲ 发病罗非鱼的超微病理形态 | 第99-103页 |
| 第六章 无乳链球菌在人工感染罗非鱼组织的分布与定位 | 第103-128页 |
| 1 试验材料 | 第103-107页 |
| ·试验菌株 | 第103页 |
| ·试验动物 | 第103页 |
| ·主要试剂 | 第103页 |
| ·主要仪器 | 第103-104页 |
| ·溶液配制 | 第104-107页 |
| 2 试验方法 | 第107-112页 |
| ·菌株的复壮和稀释 | 第107页 |
| ·人工感染和样品收集 | 第107-108页 |
| ·引物及特异性探针的设计和合成 | 第108页 |
| ·探针的稀释 | 第108页 |
| ·间接原位PCR方法的建立 | 第108-111页 |
| ·结果判断标准 | 第111-112页 |
| 3 结果 | 第112-114页 |
| ·引物的特异性 | 第112页 |
| ·间接原位PCR条件优化 | 第112页 |
| ·间接原位PCR方法的特异性 | 第112-113页 |
| ·无乳链球菌在罗非鱼部分组织中的分布规律 | 第113-114页 |
| 4 讨论 | 第114-118页 |
| ·原位PCR在微生物检测方面的应用 | 第114-115页 |
| ·间接原位PCR敏感性的影响因素 | 第115-116页 |
| ·间接原位PCR特异性的影响因素 | 第116-117页 |
| ·无乳链球菌在罗非鱼体内的分布规律 | 第117-118页 |
| 5 小结 | 第118-119页 |
| 图版Ⅳ 间接原位PCR阴性对照 | 第119-120页 |
| 图版Ⅴ 间接原位PCR阳性对照 | 第120-121页 |
| 图版Ⅵ 人工感染罗非鱼间接原位PCR检测结果 | 第121-128页 |
| 第七章 无乳链球菌cpsE基因的克隆、鉴定及分子特性分析 | 第128-142页 |
| 1 试验材料 | 第128-129页 |
| ·试验菌株 | 第128页 |
| ·主要试剂 | 第128-129页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳相关溶液的配制 | 第129页 |
| 2 试验方法 | 第129-132页 |
| ·引物设计与合成 | 第129-130页 |
| ·cpsE基因的PCR扩增 | 第130页 |
| ·cpsE基因的T克隆、测序及序列分析 | 第130-131页 |
| ·核酸序列分子特性分析 | 第131-132页 |
| ·氨基酸序列分子特性分析 | 第132页 |
| 3 结果 | 第132-140页 |
| ·无乳链球菌cpsE基因的扩增和T克隆鉴定 | 第132-133页 |
| ·核苷酸序列特征分析 | 第133页 |
| ·蛋白序列特征分析 | 第133-140页 |
| 4 讨论 | 第140-141页 |
| ·cpsE基因的研究价值 | 第140页 |
| ·引物设计与克隆连接 | 第140-141页 |
| ·cpsE基因的分子特性 | 第141页 |
| 5 小结 | 第141-142页 |
| 第八章 无乳链球菌cpsE基因重组表达质粒的构建及原核表达 | 第142-153页 |
| 1 试验材料 | 第142-144页 |
| ·试验菌株和连接载体 | 第142页 |
| ·试验动物 | 第142页 |
| ·主要试剂 | 第142-143页 |
| ·主要仪器 | 第143页 |
| ·主要溶液的配制 | 第143-144页 |
| 2 试验方法 | 第144-147页 |
| ·引物的设计与合成 | 第144页 |
| ·cpsE基因的PCR扩增 | 第144页 |
| ·cpsE基因的T-载体克隆与鉴定 | 第144页 |
| ·pET-32a(+)-CpsE重组质粒的构建及鉴定 | 第144-146页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第146页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第146页 |
| ·兔抗GBS CpsE重组蛋白多克隆抗体的制备及免疫原性检测 | 第146-147页 |
| ·兔抗CpsE重组蛋白抗体效价的检测 | 第147页 |
| 3 结果 | 第147-150页 |
| ·cpsE基因扩增结果 | 第147页 |
| ·重组表达质粒pET-32a(+)-cpsE的鉴定 | 第147-148页 |
| ·CpsE重组蛋白的表达 | 第148-149页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第149-150页 |
| ·Western-blot检测 | 第150页 |
| ·琼脂扩散试验检测血清抗体滴度 | 第150页 |
| 4 讨论 | 第150-152页 |
| ·cpsE基因重组质粒连接载体的选择 | 第150-151页 |
| ·CpsE重组蛋白原核表达主要影响因素 | 第151-152页 |
| ·兔抗CpsE重组蛋白血清的制备 | 第152页 |
| 5 小结 | 第152-153页 |
| 第九章 结论 | 第153-154页 |
| 论文创新点 | 第154-155页 |
| 参考文献 | 第155-168页 |
| 致谢 | 第168页 |
