解脂酵母中POX3基因的敲除研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-23页 |
| ·γ-癸内酯概述 | 第10页 |
| ·γ-癸内酯简介 | 第10页 |
| ·γ-癸内酯的用途 | 第10页 |
| ·内酯的研究进展 | 第10-12页 |
| ·香料物质的研究概况 | 第10-11页 |
| ·γ-癸内酯的研究概况 | 第11-12页 |
| ·γ-癸内酯的化学合成法 | 第12页 |
| ·分子内反应直接合成 | 第12页 |
| ·不饱和酸异构化、内酯化 | 第12页 |
| ·α-烯烃作原料 | 第12页 |
| ·γ-癸内酯的生物技术法 | 第12-15页 |
| ·生物合成法制取GDL | 第13页 |
| ·生物转化法制取GDL | 第13-14页 |
| ·生物催化法制取GDL | 第14页 |
| ·微生物发酵法制取GDL | 第14-15页 |
| ·解脂耶氏酵母简介 | 第15页 |
| ·β-氧化与pox3简介 | 第15-16页 |
| ·基因敲除技术 | 第16-20页 |
| ·基因敲除技术简介 | 第16-17页 |
| ·实现基因敲除的多种方法与原理 | 第17-18页 |
| ·利用同源重组进行基因敲除 | 第17页 |
| ·利用随机插入突变进行基因敲除 | 第17页 |
| ·RNA干扰引起的基因敲除 | 第17-18页 |
| ·基因敲除序列组件的构建 | 第18-19页 |
| ·多基因敲除与标记挽救 | 第19-20页 |
| ·Cre/loxP系统概述 | 第20-22页 |
| ·Cre/loxP系统简介 | 第20页 |
| ·Cre/loxP系统的作用机制 | 第20-21页 |
| ·Cre/loxP系统的研究进展 | 第21-22页 |
| ·课题的研究目的意义及主要研究内容 | 第22-23页 |
| ·研究目的及意义 | 第22页 |
| ·主要研究内容 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-33页 |
| ·材料 | 第23-27页 |
| ·试剂与仪器 | 第23-25页 |
| ·菌株与质粒 | 第25页 |
| ·培养基和培养条件 | 第25-26页 |
| ·试剂与溶液配制 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-33页 |
| ·引物的设计和配制 | 第27-28页 |
| ·引物的设计原则 | 第27-28页 |
| ·引物设计 | 第28页 |
| ·碱裂解法制备质粒pUG6和pSH65 | 第28-29页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·LiAC介导的高效酵母转化法 | 第29-30页 |
| ·提取酵母基因组DNA | 第30页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第30页 |
| ·菌落PCR验证法 | 第30-31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳法 | 第31页 |
| ·切胶回收 | 第31-32页 |
| ·生长曲线的测定 | 第32-33页 |
| 3 结果与讨论 | 第33-58页 |
| ·解脂酵母基因组DNA的提取 | 第33页 |
| ·pox3基因敲除组件的构建 | 第33-40页 |
| ·pox3基因敲除组件扩增引物的设计 | 第33-38页 |
| ·pox3基因敲除组件的构建 | 第38-40页 |
| ·最优培养基的筛选及pox3基因敲除组件的转化 | 第40-44页 |
| ·G418浓度的筛选以及最优培养基组成的确定 | 第40-42页 |
| ·基因敲除组件的转化 | 第42-43页 |
| ·基因敲除组件转化子的初步验证 | 第43-44页 |
| ·pox3阳性转化子的验证 | 第44-48页 |
| ·验证引物设计 | 第44-46页 |
| ·阳性克隆子的PCR验证 | 第46-48页 |
| ·筛选标记的切除和质粒pSH65的丢失 | 第48-54页 |
| ·质粒pSH65的转化 | 第49页 |
| ·kan~r标记基因的诱导切除 | 第49-52页 |
| ·质粒pSH65的移除 | 第52-54页 |
| ·pox3基因缺失突变株的生长实验测定 | 第54-58页 |
| ·生长曲线的测定 | 第54-55页 |
| ·基因缺失突变株的发酵分析 | 第55-58页 |
| 4 结论 | 第58-59页 |
| 5 展望 | 第59-60页 |
| 6 参考文献 | 第60-67页 |
| 7 攻读硕士学位期间论文发表情况 | 第67-68页 |
| 8 致谢 | 第68-69页 |
| 附录 | 第69-71页 |
