| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-21页 |
| 1 马铃薯Y病毒的概述 | 第9-13页 |
| ·马铃薯Y病毒的分类、病原形态及生物学 | 第9-10页 |
| ·马铃薯Y病毒的传播方式与传播介体 | 第10-11页 |
| ·马铃薯Y病毒的危害及在中国的现状 | 第11-12页 |
| ·马铃薯Y病毒的危害 | 第11页 |
| ·马铃薯Y病毒在中国的现状 | 第11-12页 |
| ·马铃薯Y病毒病的防治 | 第12-13页 |
| 2 烟蚜传毒相关蛋白RPS2 | 第13-14页 |
| ·蚜虫传毒相关蛋白理论的提出与验证 | 第13页 |
| ·蚜虫传毒相关蛋白的分类 | 第13-14页 |
| 3 RNA沉默概述 | 第14-20页 |
| ·RNA沉默的定义 | 第14页 |
| ·RNA沉默的现象的发现与研究进展 | 第14-15页 |
| ·RNA沉默的机制 | 第15-18页 |
| ·dsRNA—RNA沉默的诱导因子 | 第16页 |
| ·siRNA的形成 | 第16-17页 |
| ·siRNA的扩增 | 第17页 |
| ·mRNA的降解 | 第17-18页 |
| ·RNA沉默的应用 | 第18-20页 |
| ·RNA沉默用于功能基因组学研究 | 第18页 |
| ·RNA沉默用于防治植物病毒病 | 第18-19页 |
| ·RNA沉默用于疾病的基因治疗治疗 | 第19页 |
| ·RNA沉默用于作物品质改良 | 第19页 |
| ·RNA沉默用于昆虫功能基因研究 | 第19-20页 |
| 4 本研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 载体构建及表达 | 第21-41页 |
| 1 材料 | 第21-22页 |
| ·质粒与菌株 | 第21页 |
| ·引物合成及基因测序 | 第21页 |
| ·酶、试剂盒以及化学试剂 | 第21-22页 |
| ·抗生素以及配制方法 | 第22页 |
| ·各种溶液及试剂的配制方法 | 第22页 |
| 2 实验方法 | 第22-30页 |
| ·烟蚜(Myzus persicae)DNA的提取 | 第22-23页 |
| ·多头虫体DNA的提取方法 | 第22-23页 |
| ·单头虫体DNA的提取方法 | 第23页 |
| ·烟蚜(Myzus persicae)RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·改进一步法提取烟蚜RNA | 第23页 |
| ·改进硅粒吸附法提取烟蚜RNA | 第23-24页 |
| ·常规PCR反应 | 第24-25页 |
| ·PCR模板的处理 | 第24页 |
| ·反应体系的配制 | 第24页 |
| ·PCR反应参数设定 | 第24-25页 |
| ·PCR反应结果检测 | 第25页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第25页 |
| ·SYBR Green Ⅰ电泳 | 第25页 |
| ·EB电泳 | 第25页 |
| ·RT-PCR反应 | 第25-26页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第25页 |
| ·cDNA第二链的合成 | 第25-26页 |
| ·目的片段割胶回收 | 第26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·RbCl法制备感受态细胞 | 第26-27页 |
| ·高效感受态细胞制备法 | 第27页 |
| ·回收DNA片段与T载体的连接与转化筛选 | 第27-28页 |
| ·ABCD法提取质粒 | 第28页 |
| ·目的片段与载体的双酶切 | 第28-29页 |
| ·目的片段与载体片段的连接 | 第29页 |
| ·连接产物转化(热激法)与重组质粒的筛选 | 第29页 |
| ·大肠杆菌菌种保存 | 第29页 |
| ·dsRNA的诱导表达(IPTG诱导) | 第29页 |
| ·dsRNA的提取方法 | 第29-30页 |
| ·高盐加热提取法 | 第29-30页 |
| ·CTAB法 | 第30页 |
| ·TRIZOL法 | 第30页 |
| 3 烟蚜RPS2基因dsRNA原核表达载体的构建及表达 | 第30-31页 |
| ·烟蚜RPS2基因全序列的获得 | 第30-31页 |
| ·烟蚜RPS2基因的三个不同片段的克隆 | 第31页 |
| ·dsRNA原核表达载体的构建 | 第31页 |
| ·dsRNA的诱导表达及提取 | 第31页 |
| 4 结果与分析 | 第31-41页 |
| ·烟蚜(Myzus persicae)RNA的提取 | 第31页 |
| ·RPS2基因cDNA全序列的获得 | 第31-32页 |
| ·三段RPS2基因片段的获得 | 第32页 |
| ·RPS2基因片段与LITMUS-28i载体片段的连接 | 第32-33页 |
| ·RPS2基因dsRNA的诱导表达及dsRNA的提取 | 第33-41页 |
| 第三章 烟蚜的人工饲养、PVY的纯化与传毒 | 第41-46页 |
| 1 材料 | 第41页 |
| ·烟蚜 | 第41页 |
| ·药品、试剂 | 第41页 |
| ·病毒来源 | 第41页 |
| ·鉴别寄主与系统寄主 | 第41页 |
| 2 烟蚜人工饲养方法 | 第41-43页 |
| ·烟蚜的采集 | 第41页 |
| ·烟蚜人工饲料的配制 | 第41页 |
| ·烟蚜简易人工饲喂器的制作 | 第41-42页 |
| ·烟蚜人工饲喂环境的控制 | 第42-43页 |
| 3 传毒预备实验 | 第43-44页 |
| ·取食含RPS2片段的dsRNA对烟蚜生长的影响 | 第43页 |
| ·PVY病毒的接种纯化 | 第43-44页 |
| ·马铃薯Y病毒的接种 | 第43-44页 |
| ·接种后的纯化 | 第44页 |
| 4 结果与分析 | 第44-46页 |
| ·人工饲养烟蚜的结果 | 第44页 |
| ·取食含RPS2片段的dsRNA对烟蚜的影响 | 第44页 |
| ·PVY纯化与传毒 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-53页 |
| 附录1 本实验所用重要缩写词及中文对照 | 第53-55页 |
| 附录2 本实验所用溶液及培养基的配方 | 第55-59页 |
| 附录3 本实验所用试剂与仪器 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
