| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一部分 文献综述与实验设计 | 第13-28页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-25页 |
| 1 引言 | 第14-15页 |
| 2 亚硝酸盐的危害及来源 | 第15-17页 |
| ·亚硝酸盐对机体的危害 | 第15-16页 |
| ·亚硝酸盐的来源 | 第16-17页 |
| 3 降解亚硝酸盐的方法 | 第17-19页 |
| 4 亚硝酸盐还原酶的研究现状与展望 | 第19-25页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第25-28页 |
| 1 实验的目的及意义 | 第25-26页 |
| 2 研究内容 | 第26页 |
| 3 试验流程图 | 第26-28页 |
| 第二部分 研究论文 | 第28-81页 |
| 第一章 生物信息学分析 | 第29-37页 |
| 1 生物信息学分析软件 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29页 |
| 3 结果 | 第29-36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 第二章 植物乳杆菌 NIRS 疑似基因的克隆 | 第37-46页 |
| 1 材料与试剂 | 第37-39页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37-39页 |
| ·配制 100 mM CaCl2 | 第39页 |
| ·主要试剂盒 | 第39页 |
| 2 方法 | 第39-42页 |
| ·构建重组表达质粒 | 第39-41页 |
| ·E.coli TG1 感受态细胞的制备 | 第41-42页 |
| ·连接产物的转化 | 第42页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第42页 |
| ·序列测定 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-44页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的双酶切与 PCR 鉴定 | 第43-44页 |
| ·序列测序 | 第44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 重组蛋白的原核表达和酶活测定 | 第46-53页 |
| 1 材料与试剂 | 第46-48页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·试剂 | 第46页 |
| ·主要试剂的配制 | 第46-48页 |
| ·主要试剂盒 | 第48页 |
| 2 方法 | 第48-49页 |
| ·目的基因的表达 | 第48页 |
| ·蛋白凝胶电泳分析 | 第48-49页 |
| ·BCA 法蛋白定量 | 第49页 |
| ·表达后各重组蛋白的酶活测定 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-51页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第49-50页 |
| ·不同的蛋白样品浓度测定及酶活测定结果 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 具有酶活性的目的蛋白的相关功能与性质分析 | 第53-66页 |
| 1 生物信息学工具 | 第53页 |
| 2 方法 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-64页 |
| ·HP、GR、ORD 蛋白的完整开放阅读框（Open Reading Fram，ORF）： | 第53-55页 |
| ·HP、GR、ORD 蛋白的等电点及分子量预测 | 第55-56页 |
| ·HP、GR、ORD 蛋白的二级结构 | 第56-57页 |
| ·HP、GR、ORD 蛋白的三级结构预测 | 第57-58页 |
| ·HP、GR、ORD 蛋白的跨膜区预测 | 第58-60页 |
| ·HP、GR、ORD 蛋白的疏水性分析 | 第60-62页 |
| ·HP、GR、ORD 蛋白的信号肽预测 | 第62-63页 |
| ·HP、GR、ORD 蛋白在细胞内的定位分析 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 第五章 植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶类型的初步鉴定 | 第66-81页 |
| 1 材料与试剂 | 第66-68页 |
| 2 实验方法 | 第68-76页 |
| ·表达质粒的重组构建 | 第68-72页 |
| ·重组质粒 pET-28a(+)-NrfA 在 BL21(DE3)中表达 | 第72页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第72-73页 |
| ·抗体的制备 | 第73页 |
| ·制备的多抗效价测定 | 第73-74页 |
| ·融合蛋白的Western Blotting检测 | 第74-75页 |
| ·NrfA多克隆抗体在鉴定植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶类型中的应用 | 第75-76页 |
| 3 结果 | 第76-79页 |
| ·NrfA目的基因片段的扩增 | 第76页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-NrfA的双酶切及PCR鉴定 | 第76-77页 |
| ·NrfA 的诱导表达、纯化与鉴定 | 第77-78页 |
| ·抗体效价的测定 | 第78页 |
| ·Western Blotting检测 | 第78-79页 |
| ·NrfA多克隆抗体在鉴定植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶类型中的应用 | 第79页 |
| 4 讨论 | 第79-81页 |
| 结论与展望 | 第81-84页 |
| 1 结论 | 第82页 |
| 2 展望 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-93页 |
| 发表论文和专利 | 第93页 |
