| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 前言 | 第11-20页 |
| ·HEV的基本病毒学特性 | 第11-13页 |
| ·HEV的基因型、基因亚型及不同型别的地理分布 | 第13-17页 |
| ·HEV在动物中的流行 | 第17-18页 |
| ·HEV的跨种属感染及动物HEv感染人的潜在危险性 | 第18-19页 |
| ·本研究的目的和内容 | 第19-20页 |
| 第一部分 我国家畜、家禽中戊型肝炎病毒(HEV)流行情况的研究 | 第20-47页 |
| 1 材料和方法 | 第21-29页 |
| ·血清样本的采集、运输和保存 | 第21页 |
| ·HEV抗原、抗体的检测 | 第21-22页 |
| ·HEV总抗体的检测 | 第22页 |
| ·HEV抗原的检测 | 第22页 |
| ·HEV RNA的检测 | 第22-26页 |
| ·核酸的提取 | 第23页 |
| ·Nested RT-PCR | 第23-25页 |
| ·PCR产物的序列测定 | 第25-26页 |
| ·基因序列的比对与分析 | 第26页 |
| ·血清中HEV RNA的定量 | 第26-27页 |
| ·样本的准备 | 第26页 |
| ·Real time PCR | 第26-27页 |
| ·病毒载量的计算 | 第27页 |
| ·统计学分析 | 第27-29页 |
| 2 结果 | 第29-41页 |
| ·猪、牛、羊中HEV抗体检测结果 | 第29页 |
| ·猪、牛、羊中HEV抗原和RNA的检测结果 | 第29-30页 |
| ·家兔中HEV抗体的检测结果 | 第30-31页 |
| ·家兔中HEV抗原和RNA的检测结果 | 第31-32页 |
| ·兔血清中HEV抗体、抗原以及HEV RNA的相互关系 | 第32-33页 |
| ·鸡、鸭中HEV抗体检测结果 | 第33-34页 |
| ·鸡、鸭中HEV抗原及HEV RNA的检测结果 | 第34-35页 |
| ·HEV基因序列分析结果 | 第35-36页 |
| ·猪HEV序列分析结果 | 第35页 |
| ·兔HEV序列分析结果 | 第35-36页 |
| ·猪和兔血清中HEV的载量 | 第36-41页 |
| 3 讨论 | 第41-47页 |
| 第二部分 HEV ORF3蛋白与人肝细胞蛋白相互作用的研究 | 第47-92页 |
| 1 材料和方法 | 第48-70页 |
| ·材料标本 | 第48-52页 |
| ·基因1型、4型、兔HEV及禽HEV的质粒 | 第48页 |
| ·Mate&Plate人肝细胞文库 | 第48页 |
| ·Y2HGold酵母双杂交系统 | 第48-51页 |
| ·免疫共沉淀系统 | 第51-52页 |
| ·293FT细胞 | 第52页 |
| ·酵母双杂交实验 | 第52-64页 |
| ·诱饵质粒(pGBKT7-ORF3)的构建 | 第53-57页 |
| ·诱饵质粒和捕获质粒自激活和毒性鉴定 | 第57页 |
| ·诱饵质粒的大量制备 | 第57-59页 |
| ·诱饵质粒转化酵母菌Y2HGold | 第59-60页 |
| ·酵母双杂交配对筛选实验 | 第60-61页 |
| ·酵母双杂交阳性克隆的确认及捕获质粒的提取 | 第61-63页 |
| ·对捕获质粒(pGADT7-bait)中的Bait基因序列测定及分析 | 第63页 |
| ·酵母双杂交质粒共转染实验 | 第63-64页 |
| ·化学发光免疫共沉淀实验 | 第64-69页 |
| ·AcGFP1-Bait和ProLabel-Prey质粒的构建 | 第64-67页 |
| ·AcGFP1-Bait和ProLabel-Prey共转染293FT细胞 | 第67-68页 |
| ·免疫共沉淀实验 | 第68-69页 |
| ·ORF3蛋白与相互作用蛋白的生物信息学分析 | 第69-70页 |
| 2 结果 | 第70-87页 |
| ·酵母双杂交实验筛选结果 | 第70-78页 |
| ·HEV ORF3诱饵质粒的构建及毒性和自激活作用的验证 | 第70-72页 |
| ·酵母配对杂交筛选实验结果 | 第72-78页 |
| ·免疫共沉淀反应对酵母双杂交筛选结果的评价 | 第78-80页 |
| ·ORF3与GFP融合蛋白表达质粒pAcGFP1-ORF3的构建 | 第78页 |
| ·宿主细胞蛋白与Prolab1标签融合蛋白表达质粒pProlable-Bait的构建 | 第78-79页 |
| ·HEV ORF3蛋白与肝细胞蛋白真核细胞内免疫共沉淀结果 | 第79-80页 |
| ·ORF3蛋白与肝细胞蛋白相互作用网络的拓扑分析 | 第80-82页 |
| ·HEV ORF3网络蛋白功能富集聚类分析 | 第82-84页 |
| ·血液凝固 | 第82-83页 |
| ·氧化应激 | 第83-84页 |
| ·铁代谢 | 第84页 |
| ·基因1、4型及兔HEVORF3蛋白与宿主蛋白相互作用的比较 | 第84-87页 |
| 3 讨论 | 第87-92页 |
| 小结 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-105页 |
| 附录 1.本课题所使用的主要仪器 | 第105-106页 |
| 附录 2.缩略词一览表 | 第106-108页 |
| 博士期间发表的主要论文 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
