| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 引言 | 第10-24页 |
| 1 几丁质酶概述 | 第10-17页 |
| ·几丁质酶分类 | 第10-11页 |
| ·产几丁质酶微生物的筛选 | 第11页 |
| ·产几丁质酶的微生物种类 | 第11页 |
| ·微生物几丁质酶理化性质 | 第11-13页 |
| ·微生物几丁质酶的特点 | 第13页 |
| ·微生物几丁质酶基因的分子生物学特点 | 第13-15页 |
| ·几丁质酶的用途 | 第15页 |
| ·苏云金芽孢杆菌几丁质酶研究 | 第15-17页 |
| 2 微生物几丁质酶的应用 | 第17-21页 |
| ·处理几丁质废物,保护环境 | 第17页 |
| ·几丁质酶及其降解产物的应用 | 第17-18页 |
| ·在抗病基因工程中的应用 | 第18页 |
| ·用于植物病原真菌的生物防治 | 第18-19页 |
| ·制备真菌原生质体 | 第19页 |
| ·几丁质酶在医学上的应用 | 第19-20页 |
| ·几丁质酶与Bt的协同作用 | 第20-21页 |
| ·Bt几丁质酶对真菌的抑制作用 | 第21页 |
| 3 定点突变技术概述 | 第21-23页 |
| 4 几丁质酶定点突变研究 | 第23页 |
| 5 本研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 材料与方法 | 第24-37页 |
| 1 材料 | 第24-26页 |
| ·供试菌株 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·质粒载体 | 第24页 |
| ·酶与试剂 | 第24-26页 |
| 2 方法 | 第26-37页 |
| ·细菌培养 | 第26页 |
| ·Bt总DNA的提取 | 第26页 |
| ·几丁质酶基因克隆 | 第26-30页 |
| ·突变体构建 | 第30-33页 |
| ·几丁质酶蛋白的原核表达 | 第33-36页 |
| ·酶活的测定 | 第36页 |
| ·胶体几丁质平板降解实验 | 第36-37页 |
| 结果与分析 | 第37-51页 |
| 1 几丁质酶基因的克隆及序列分析 | 第37-43页 |
| ·PCR扩增及重组质粒的鉴定 | 第37-38页 |
| ·序列测定 | 第38页 |
| ·生物信息学序列分析 | 第38-43页 |
| 2 突变体的构建 | 第43-44页 |
| ·突变体构建 | 第43-44页 |
| ·序列测定 | 第44页 |
| 3 原核表达 | 第44-51页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第44-46页 |
| ·目的蛋白诱导表达 | 第46-47页 |
| ·几丁质酶酶活测定 | 第47-49页 |
| ·胶体几丁质降解实验 | 第49-51页 |
| 讨论 | 第51-55页 |
| 1 F201在Bt几丁质酶催化过程中的作用机理探讨 | 第51页 |
| 2 G203在Bt几丁质酶催化过程中的作用机理探讨 | 第51-52页 |
| 3 D207在Bt几丁质酶催化过程中的作用机理探讨 | 第52页 |
| 4 D205在Bt几丁质酶催化过程中的作用机理探讨 | 第52-53页 |
| 5 W208在Bt几丁质酶催化过程中的作用机理探讨 | 第53页 |
| 6 E209在Bt几丁质酶催化过程中的作用机理探讨 | 第53-54页 |
| 7 小结 | 第54页 |
| 8 下一步实验计划 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
