| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-28页 |
| ·MDV研究简述 | 第14-22页 |
| ·MD和MDV | 第14-15页 |
| ·MDV的分类 | 第15-16页 |
| ·MDV的病原学特征 | 第16-18页 |
| ·MDV的基因利蛋白 | 第18-20页 |
| ·MDV的增殖与感染 | 第20-21页 |
| ·MDV的疫苗防控策略 | 第21-22页 |
| ·细菌人工染色体技术研究进展 | 第22-27页 |
| ·BAC载体系统简述 | 第22-23页 |
| ·BAC分子克隆化病毒 | 第23-24页 |
| ·细菌人工染色体的修饰技术 | 第24-27页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 细菌人工染色体重组病毒转移载体的构建 | 第28-43页 |
| ·材料 | 第28-29页 |
| ·质粒、菌种、病毒与试剂 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-34页 |
| ·细菌人工染色体重组病毒转移载体的设计及技术路线 | 第29-31页 |
| ·BAC载体基本功能基因序列制备 | 第31-33页 |
| ·表达Eco-gpt的正选择标记基因的构建 | 第33页 |
| ·转移载体pUAB-gpt-BAC11的构建 | 第33-34页 |
| ·结果 | 第34-39页 |
| ·BAC载体基本功能基因序列制备 | 第34-36页 |
| ·表达Eco-gpt的正选择标记基因的鉴定 | 第36-38页 |
| ·BAC-rv-MDV814重组病毒转移载体pUAB-gpt-BAC11的鉴定 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-43页 |
| ·制备BAC载体基本功能基因序列 | 第39-40页 |
| ·表达Eco-gpt的正选择标记基因 | 第40-41页 |
| ·细菌人工染色体重组病毒转移载体的核心序列 | 第41-43页 |
| 第三章 细菌人工染色体重组马立克氏病病毒的构建 | 第43-54页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·菌种、细胞、病毒与试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43-44页 |
| ·方法 | 第44-48页 |
| ·电转化转移载体质粒pUAB-gpt-BAC11到宿主菌DH10B | 第44-45页 |
| ·转移载体质粒的提取和纯化 | 第45页 |
| ·转染用MDV感染细胞总DNA的制备 | 第45页 |
| ·转移载体质粒与Total-DNA的共转染 | 第45-46页 |
| ·重组病毒rv-MDV814的初步筛选和富集 | 第46-47页 |
| ·重组病毒rv-MDV814的纯化 | 第47页 |
| ·重组病毒rv-MDV814的鉴定 | 第47-48页 |
| ·结果 | 第48-51页 |
| ·转移载体质粒的电转化、保种、纯化及纯度测定 | 第48页 |
| ·转移载体质粒与Total-DNA的共转染启动病毒感染 | 第48-49页 |
| ·重组病毒rv-MDV814的筛选和纯化 | 第49-50页 |
| ·重组病毒rv-MDV814的鉴定结果 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-54页 |
| 第四章 感染性BAC分子克隆化病毒的筛选 | 第54-71页 |
| ·材料 | 第54-55页 |
| ·菌种、细胞、病毒与试剂 | 第54页 |
| ·主要仪器 | 第54-55页 |
| ·方法 | 第55-62页 |
| ·构建感染性BAC分子克隆化病毒的技术路线 | 第55-56页 |
| ·电转化分子克隆化病毒感受态细菌DH10B的制备 | 第56页 |
| ·环化重组病毒细胞总DNA的提取 | 第56页 |
| ·电转化筛选BAC转化子 | 第56-57页 |
| ·BAC转化子的初步鉴定 | 第57页 |
| ·BAC分子克隆化病毒克隆质粒的提取和纯化 | 第57页 |
| ·BAC-DNA的限制性内切酶酶切图谱分析 | 第57-58页 |
| ·BAC分子克隆化病毒的外源目的插入片段的PCR鉴定 | 第58页 |
| ·BAC分子克隆化病毒中病毒基因组的PCR鉴定 | 第58-60页 |
| ·转染用BAC-DNA的提取和纯化 | 第60-61页 |
| ·CEF载体总DNA的制备 | 第61页 |
| ·BAC-DNA转染CEF | 第61页 |
| ·救重组病毒BAC-derived MDV814 | 第61-62页 |
| ·拯救重组病毒BAC-derived MDV814的鉴定 | 第62页 |
| ·重组病毒、野生病毒与拯救的重组病毒在体外生长特性的比较 | 第62页 |
| ·结果 | 第62-67页 |
| ·电转化筛选BAC转化子 | 第62-63页 |
| ·BAC-DNA的限制性内切酶酶切图谱分析结果 | 第63-64页 |
| ·BAC分子克隆化病毒的外源目的插入片段的PCR鉴定结果 | 第64页 |
| ·BAC分子克隆化病毒的病毒基因组的PCR鉴定结果 | 第64-65页 |
| ·BAC-DNA的浓度和纯度 | 第65-66页 |
| ·拯救的重组病毒BAC-derivedMDV814 | 第66页 |
| ·重组病毒rv-MDV814、野生病毒wt-MDV814与拯救的重组病毒BAC-redrived MDV814的病毒蚀斑的形态比较 | 第66-67页 |
| ·重组病毒rv-MDV814、野生病毒wt-MDV814与拯救的重组病毒BAC-derived MDV814的病毒生长曲线的比较 | 第67页 |
| ·讨论 | 第67-71页 |
| 第五章 BAC-based vaccine免疫效力初步试验 | 第71-79页 |
| ·材料 | 第71页 |
| ·病毒、菌种与试剂 | 第71页 |
| ·主要仪器 | 第71页 |
| ·方法 | 第71-74页 |
| ·动物试验设计 | 第71-73页 |
| ·MDV京-1强毒株的复壮 | 第73页 |
| ·各种BAC-based免疫制剂的制备 | 第73-74页 |
| ·结果 | 第74-77页 |
| ·各试验组鸡只存活率及攻毒死亡变化曲线 | 第74-75页 |
| ·各试验组鸡只MD发病情况 | 第75-77页 |
| ·讨论 | 第77-79页 |
| 第六章 全文结论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 作者简历 | 第86页 |
