| 英文缩略词 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 一 前言 | 第11-13页 |
| 二 材料与方法 | 第13-32页 |
| (一) 材料 | 第13-16页 |
| 1.质粒与载体 | 第13页 |
| 2.实验动物 | 第13页 |
| 3.菌株 | 第13页 |
| 4.细胞系 | 第13页 |
| 5.ELISPOT刺激物 | 第13页 |
| 6.试剂耗材 | 第13-14页 |
| 7.主要仪器 | 第14-15页 |
| 8.常用溶液 | 第15-16页 |
| (二) 方法 | 第16-32页 |
| 1.大肠杆菌E.coli化学感受态的制备 | 第16页 |
| 2.点突变及片段删除 | 第16-18页 |
| 3.转化大肠杆菌E-coli化学感受态 | 第18-19页 |
| 4.质粒小量提取 | 第19-20页 |
| 5.质粒酶切鉴定 | 第20页 |
| 6.将原始及突变Env克隆入pcDNATM3.1 Directional TOPO载体 | 第20-22页 |
| 7.琼脂糖凝胶回收 | 第22页 |
| 8.LipofectamineTM2000转染真核细胞,瞬时表达 | 第22-23页 |
| 9.转染细胞的收集与处理 | 第23页 |
| 10.SDS-PAGE电泳 | 第23-24页 |
| 11.Western blot鉴定目的蛋白 | 第24-25页 |
| 12.质粒的大量提取及定量 | 第25-26页 |
| 13.免疫动物 | 第26页 |
| 14.ELISA操作流程 | 第26-27页 |
| 15.ELISPOT操作流程 | 第27-29页 |
| 16.功能性假病毒形成能力检测 | 第29-31页 |
| 17.中和试验操作流程 | 第31-32页 |
| 三 实验结果 | 第32-59页 |
| 1.质粒的酶切鉴定 | 第32页 |
| 2.突变位点的选择及突变克隆的获得 | 第32-37页 |
| 3.原始及突变克隆的体外表达 | 第37-39页 |
| 4.原始及突变克隆质粒大量提取、鉴定及定量 | 第39-40页 |
| 5.Env改造对功能性假病毒形成的影响 | 第40-42页 |
| 6.家兔体液免疫评价 | 第42-47页 |
| 7.小鼠细胞及体液免疫评价 | 第47-59页 |
| 四 讨论 | 第59-64页 |
| 小结 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 综述:DNA疫苗的发展现状 | 第70-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |