| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 一、引言 | 第9-26页 |
| 1.乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV) | 第9-17页 |
| ·HBV发现简史 | 第9-11页 |
| ·HBV的基因组特征 | 第11-13页 |
| ·HBV流行现状 | 第13-14页 |
| ·HBV检测方法 | 第14-17页 |
| 2.实时荧光定量PCR(Real-time Fluorescent Quantitative PCR,FQ-PCR) | 第17-25页 |
| ·FQ-PCR原理 | 第17-21页 |
| ·FQ-PCR的特点 | 第21页 |
| ·FQ-PCR的定量方法 | 第21-22页 |
| ·影响FQ-PCR的主要因素 | 第22页 |
| ·常用的FQ-PCR仪 | 第22-23页 |
| ·FQ-PCR在分子生物学领域中的应用 | 第23-24页 |
| ·实时荧光定量PCR技术存在的不足 | 第24-25页 |
| 3.本课题研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 二、材料与方法 | 第26-31页 |
| 1.实验材料 | 第26-27页 |
| ·质粒和菌株 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·主要溶液 | 第26-27页 |
| 2.实验方法 | 第27-31页 |
| ·引物和探针设计 | 第27页 |
| ·PCR扩增pBR322-HBV质粒前C区、C区和X区保守序列 | 第27-28页 |
| ·AT亚克隆 | 第28页 |
| ·菌落PCR筛选阳性克隆和测序 | 第28页 |
| ·HBV-DNA荧光定量PCR定量DNA标准的制备 | 第28-30页 |
| ·HBV-DNA荧光定量PCR定量检测标准曲线的制备 | 第30页 |
| ·HBV-DNA荧光定量PCR检测线性范围、精度和重复性确定 | 第30-31页 |
| 三、实验结果 | 第31-43页 |
| 1.从pBR322-HBV质粒中扩增目的片段 | 第31-32页 |
| ·前C区和C区目的片段扩增 | 第31页 |
| ·X区目的片段扩增 | 第31-32页 |
| 2.阳性亚克隆的菌落PCR初步鉴定及测序结果 | 第32-35页 |
| ·前C区和C区阳性亚克隆子菌落PCR电泳检测及测序 | 第32-34页 |
| ·X区阳性亚克隆子菌落PCR电泳检测及测序 | 第34-35页 |
| 3.HBV-DNA标准品制备 | 第35-36页 |
| 4.常规PCR检测灵敏度 | 第36-40页 |
| ·常规PCR检测前C区条件的优化及灵敏度 | 第36-37页 |
| ·常规PCR检测C区条件的优化及灵敏度 | 第37-39页 |
| ·常规PCR检测X区条件的优化及灵敏度 | 第39-40页 |
| 5.HBV-DNA荧光定量PCR检测标准曲线 | 第40-42页 |
| 6.HBV-DNA荧光定量PCR精度 | 第42页 |
| 7.HBV-DNA荧光定量PCR重复性 | 第42-43页 |
| 四、讨论 | 第43-47页 |
| 1.亚克隆分析 | 第43页 |
| 2.常规PCR分析 | 第43-44页 |
| 3.HBV-DNA FQ-PCR检测效果评价 | 第44-46页 |
| 4.后续工作 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 缩写词 | 第52-53页 |
| 在校期间发表的论文 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
