猪附红细胞体ORFs基因合成、表达及鉴定
| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-23页 |
| ·附红细胞体的概述 | 第13-22页 |
| ·病原学 | 第13-16页 |
| ·附红细胞体流行史 | 第16-17页 |
| ·致病机理 | 第17页 |
| ·目前研究的重要的猪附红细胞体基因 | 第17-18页 |
| ·附红细胞体的诊断 | 第18-21页 |
| ·治疗 | 第21-22页 |
| ·全基因合成技术 | 第22-23页 |
| 2. 材料与方法 | 第23-39页 |
| ·菌种与质粒 | 第23页 |
| ·试剂和酶 | 第23页 |
| ·常用缓冲液及仪器设备 | 第23页 |
| ·引物设计与合成 | 第23-27页 |
| ·ORF2 的引物设计与合成 | 第23-24页 |
| ·ORF4 的引物设计与合成 | 第24-25页 |
| ·ORF5 的引物设计与合成 | 第25-26页 |
| ·ORF9 的引物设计与合成 | 第26-27页 |
| ·全基因合成 | 第27-29页 |
| ·ORF2 的全基因合成 | 第27-28页 |
| ·ORF4 的全基因合成 | 第28页 |
| ·ORF5 的全基因合成 | 第28-29页 |
| ·ORF9 的全基因合成 | 第29页 |
| ·基因的克隆与测序 | 第29-33页 |
| ·ORF2 基因的克隆与测序 | 第29-32页 |
| ·ORF4 基因的克隆与测序 | 第32页 |
| ·ORF5 基因的克隆与测序 | 第32-33页 |
| ·ORF9 基因的克隆与测序 | 第33页 |
| ·基因表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·ORF2 基因表达载体的构建 | 第33页 |
| ·ORF4 基因表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·ORF5 基因表达载体的构建 | 第34页 |
| ·ORF9 基因表达载体的构建 | 第34页 |
| ·工程菌的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·ORF2 基因的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·ORF4 表达菌的诱导表达 | 第35页 |
| ·ORF5 工程菌的诱导表达 | 第35页 |
| ·ORF9 工程菌的诱导表达 | 第35页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 检测 | 第35-37页 |
| ·ORF2 基因表达产物的SDS-PAGE 检测 | 第35-36页 |
| ·ORF4 表达产物的SDS-PAGE 检测 | 第36页 |
| ·ORF5 表达产物的SDS-PAGE 检测 | 第36-37页 |
| ·ORF9 表达产物的SDS-PAGE 检测 | 第37页 |
| ·包涵体蛋白的确定 | 第37页 |
| ·ORF5 包涵体蛋白的确定 | 第37页 |
| ·ORF9 包涵体蛋白的确定 | 第37页 |
| ·表达产物的Western 鉴定 | 第37-38页 |
| ·ORF2 基因表达产物的Western 鉴定 | 第37-38页 |
| ·ORF5 基因表达产物的Western 鉴定 | 第38页 |
| ·ORF9 基因表达产物的Western 鉴定 | 第38页 |
| ·序列分析与结构预测 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-52页 |
| ·密码子的优化及化学合成 | 第39-40页 |
| ·ORF2 基因优化后的氨基酸序列分析 | 第39页 |
| ·优化后的ORF4 编码蛋白序列分析 | 第39-40页 |
| ·优化后的ORF5 编码蛋白序列分析 | 第40页 |
| ·优化后的ORF9 编码蛋白序列分析 | 第40页 |
| ·优化后的基因密码子在大肠杆菌中的相对适应性分析 | 第40-43页 |
| ·优化后的基因密码子在大肠杆菌中的相对适应性分析 | 第40-41页 |
| ·优化后的ORF4 基因在大肠杆菌中的适应性分析 | 第41-42页 |
| ·ORF5 编码蛋白序列适应性分析 | 第42页 |
| ·ORF9 编码蛋白序列适应性分析 | 第42-43页 |
| ·PCR 扩增结果 | 第43-44页 |
| ·ORF2 首次PCR、二次PCR 扩增结果 | 第43页 |
| ·ORF4 扩增结果 | 第43页 |
| ·ORF5 扩增结果 | 第43-44页 |
| ·ORF9 扩增结果 | 第44页 |
| ·表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·ORF2 表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·ORF4 基因表达载体的构建 | 第45页 |
| ·ORF5 表达载体的构建 | 第45页 |
| ·ORF9 表达载体的构建 | 第45页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中表达 | 第45-47页 |
| ·ORF2 基因的表达 | 第45-46页 |
| ·ORF4 基因的表达 | 第46页 |
| ·ORF5 基因的表达 | 第46页 |
| ·ORF9 基因的表达 | 第46-47页 |
| ·蛋白的Western 鉴定 | 第47-48页 |
| ·ORF2 蛋白的Western 鉴定 | 第47页 |
| ·ORF5 蛋白的Western 检测 | 第47-48页 |
| ·ORF9 蛋白的Western 检测 | 第48页 |
| ·包涵体蛋白的确定 | 第48-49页 |
| ·ORF5 包涵体蛋白的确定 | 第48页 |
| ·ORF9 包涵体蛋白的确定 | 第48-49页 |
| ·基因分析 | 第49-52页 |
| ·ORF2 基因分析 | 第49-50页 |
| ·ORF4 基因分析 | 第50-51页 |
| ·ORF5 基因分析 | 第51页 |
| ·ORF9 基因分析 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 6 参考文献 | 第55-64页 |
| 7 附录常用试剂的配制 | 第64-66页 |
| 8 致谢 | 第66-67页 |
| 9 攻读学位期间发表论文情况 | 第67-68页 |
| 硕士学位论文内容简介及自评 | 第68页 |
