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拟南芥AtLACS9和AtGPAT9基因的克隆及大豆的遗传转化

摘要第1-4页
Abstract第4-12页
1 引言第12-19页
   ·植物油脂的合成第12-13页
   ·拟南芥 AtLACS 家族第13-14页
   ·植物 GPATs第14-15页
     ·可溶性 GPATs第14页
     ·膜结合型 GPATs第14-15页
   ·大豆的遗传转化第15-19页
     ·大豆简介第15页
     ·大豆的遗传转化第15-19页
       ·转化受体第16-17页
       ·转化菌株第17页
       ·培养基及共培养条件第17-18页
       ·大豆转基因研究进展第18-19页
   ·本研究的目的和意义第19页
2 材料与方法第19-30页
   ·实验材料第19-22页
     ·植物材料及其处理第19页
     ·宿主菌株与质粒第19-20页
     ·试剂与酶第20页
     ·培养基与溶液及其配制第20-21页
     ·引物第21-22页
   ·实验方法第22-30页
     ·总 RNA 的提取第22-23页
     ·cDNA 的合成第23-24页
     ·目的基因cDNA 的 RT-PCR 扩增第24-25页
     ·PCR 产物的胶回收和纯化第25页
     ·回收 DNA 片段与克隆载体连接第25页
     ·大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备(CaCl_2法)第25-26页
     ·连接产物转化 DH5α感受态细胞第26页
     ·转化克隆的菌液 PCR 鉴定第26页
     ·菌液测序第26-27页
     ·质粒 DNA 的提取第27页
     ·菌液的保存第27页
     ·表达载体的改造及构建第27-28页
     ·农杆菌的转化第28页
     ·无菌苗的培养第28页
     ·农杆菌的培养及制备第28页
     ·大豆遗传转化:子叶节法第28-29页
     ·芽诱导第29页
     ·芽伸长第29页
     ·生根及移栽第29页
     ·抗性植株的 PCR 检测第29-30页
3 结果与分析第30-43页
   ·表达载体p3301 的改造第30-31页
   ·AtLACS9 基因的克隆及其表达载体的构建第31-36页
     ·AtLACS9 基因的克隆及序列分析第31-33页
     ·AtLACS9 超表达载体的构建第33-34页
     ·超表达载体转化农杆菌第34-35页
     ·AtLACS9 种子特异性表达载体的构建第35-36页
     ·种子特异性表达载体转化农杆菌第36页
   ·AtGPAT9 基因的克隆及其表达载体的构建第36-41页
     ·AtGPAT9 基因的克隆及序列分析第36-40页
     ·AtGPAT9 表达载体的构建第40-41页
     ·表达载体转化农杆菌第41页
   ·转基因大豆的获得第41-42页
   ·转基因大豆的 PCR 检测第42-43页
4 讨论第43-45页
   ·启动子的选择第43页
   ·AtLACS9 和 AtGPAT9 在 TAGs 合成中起重要作用第43-44页
   ·提高大豆转化效率的关键技术第44-45页
   ·农杆菌污染的去除第45页
   ·芽伸长及移栽存活率第45页
5 结论第45-47页
致谢第47-48页
参考文献第48-57页
作者简介第57页

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