| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 插图和附表清单 | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第10-17页 |
| ·皮肤的结构 | 第10页 |
| ·毛囊的结构及特征 | 第10-11页 |
| ·毛囊生长发育的调控分子 | 第11-12页 |
| ·毛囊调控分子的主要作用 | 第11页 |
| ·成纤维细胞生长因子(FGF) | 第11-12页 |
| ·基因敲除 | 第12-16页 |
| ·基因敲除的基本流程 | 第13页 |
| ·基因敲除载体的构建 | 第13页 |
| ·敲除载体的导入 | 第13-14页 |
| ·同源重组子的筛选 | 第14页 |
| ·检测 | 第14页 |
| ·影响基因敲除技术的因素 | 第14-15页 |
| ·提高基因敲除效率的途径 | 第15页 |
| ·基因敲除技术的应用 | 第15-16页 |
| ·本项目的研究的意义 | 第16-17页 |
| 2 实验一、FGF5 启动子、第一外显子、第一内含子片段的扩增及序列分析 | 第17-31页 |
| ·材料 | 第17-18页 |
| ·实验动物及其血液的采集 | 第17页 |
| ·常用试剂及缓冲液配制 | 第17-18页 |
| ·主要仪器设备及耗材 | 第18页 |
| ·实验方法与步骤 | 第18-22页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第18页 |
| ·1.6KB、9.0KBFGF5 基因的克隆测序 | 第18-21页 |
| ·1.8KB、2.4KB、4.5KBFGF5 基因的克隆测序 | 第21-22页 |
| ·结果与分析 | 第22-30页 |
| ·模板DNA 的提取结果 | 第22-23页 |
| ·1.6KB、9.0KB FGF5 基因的克隆测序 | 第23-25页 |
| ·1.8KB、2.4KB、4.5KBFGF5 基因的克隆测序 | 第25页 |
| ·FGF 启动子、第一外显子、第一内含子、第二外显子序列的拼接 | 第25-29页 |
| ·绒山羊FGF5 基因的第一内含子序列与人、牛基因组序列的比对 | 第29-30页 |
| ·讨论 | 第30-31页 |
| 3 实验二、FGF5 基因的 CDS 区克隆及多态性分析 | 第31-45页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·实验动物及其血液的采集 | 第31页 |
| ·常用试剂及缓冲液配制 | 第31页 |
| ·主要仪器设备及耗材 | 第31-32页 |
| ·实验方法与步骤 | 第32-34页 |
| ·基因组 DNA 的提取 | 第32页 |
| ·目的片度 PCR 扩增 | 第32-34页 |
| ·统计及生物信息学分析 | 第34页 |
| ·结果与分析 | 第34-45页 |
| ·模板 DNA 的提取结果 | 第34页 |
| ·FGF5 基因的PCR 扩增结果 | 第34-35页 |
| ·FGF5 基因的外显子序列及氨基酸分析 | 第35-42页 |
| ·讨论 | 第42-45页 |
| 4 实验三、绒山羊 FGF5 基因敲除载体的构建 | 第45-65页 |
| ·敲除载体的构建策略 | 第45页 |
| ·实验的材料与方法 | 第45-57页 |
| ·实验材料 | 第45-48页 |
| ·实验方法与步骤 | 第48-50页 |
| ·短臂和长臂的扩增克隆鉴定 | 第50-54页 |
| ·绒山羊 FGF5 基因敲除载体构建 | 第54-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-65页 |
| ·同源臂的扩增与克隆鉴定 | 第57-59页 |
| ·基因敲除载体的构建和鉴定 | 第59-61页 |
| ·绒山羊 FGF5 基因敲除载体同源臂连接方向的 PCR 鉴定与序列分析 | 第61-65页 |
| ·讨论 | 第65页 |
| 5 结论 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-72页 |
| 附录 | 第72-74页 |
| 作者简介 | 第74页 |
