| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第1章 检测猪肺炎支原体抗体的ELISA方法的研究 | 第9-40页 |
| 1 文献综述 | 第9-18页 |
| ·猪肺炎支原体病原特征 | 第9-10页 |
| ·生物学特性 | 第9-10页 |
| ·猪肺炎支原体的致病机理 | 第10-11页 |
| ·猪肺炎支原体基因的研究 | 第11-12页 |
| ·猪支原体肺炎疫苗研究现状 | 第12-13页 |
| ·弱毒疫苗 | 第12页 |
| ·基因工程疫苗 | 第12-13页 |
| ·猪支原体肺炎的流行病学特点 | 第13页 |
| ·猪支原体肺炎诊断方法的研究进展 | 第13-17页 |
| ·临床诊断 | 第13页 |
| ·血清学抗体检测 | 第13-15页 |
| ·病原学诊断检测 | 第15-16页 |
| ·核酸探针检测 | 第16页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第16-17页 |
| ·MHP的预防与控制 | 第17-18页 |
| 2 目的和意义 | 第18-19页 |
| 3 材料与方法 | 第19-30页 |
| ·材料 | 第19-23页 |
| ·菌株和质粒 | 第19-20页 |
| ·酶及主要试剂 | 第20页 |
| ·血清和试验动物 | 第20页 |
| ·细菌培养基 | 第20-21页 |
| ·质粒抽提 | 第21页 |
| ·SDS-PAGE相关溶液 | 第21页 |
| ·Western-blot相关容液： | 第21页 |
| ·提取包涵体的相关溶液： | 第21-22页 |
| ·ELISA相关溶液： | 第22页 |
| ·谷胱苷肽—琼脂糖柱纯化蛋白相关试剂： | 第22页 |
| ·其它溶液 | 第22-23页 |
| ·猪肺炎支原体培养基(A26)的制备 | 第23页 |
| ·引物 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-30页 |
| ·PCR模板的制备 | 第23页 |
| ·PCR扩增乳酸脱氢酶LDH基因 | 第23-24页 |
| ·DNA回收 | 第24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·克隆质粒的构建 | 第24页 |
| ·质粒的小量制备 | 第24-25页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法) | 第25页 |
| ·DNA重组技术(DNA酶切、连接) | 第25页 |
| ·转化宿主菌大肠杆菌BI_(21) | 第25-26页 |
| ·LDH基因的表达与纯化 | 第26-27页 |
| ·LDH基因表达产物的Western-blot鉴定 | 第27-28页 |
| ·LDH蛋白高免血清的制备 | 第28页 |
| ·间接ELISA实验操作程序 | 第28页 |
| ·LDH-ELISA实验条件的确定 | 第28-30页 |
| 4 结果与分析 | 第30-37页 |
| ·PCR扩增结果 | 第30页 |
| ·克隆载体与表达载体的构建 | 第30-32页 |
| ·LDH基因的表达与纯化 | 第32-33页 |
| ·LDH基因表达产物的Western-blot鉴定 | 第33-34页 |
| ·猪肺炎支原体乳酸脱氢酶LDH抗血清 | 第34页 |
| ·间接ELISA的最佳反应条件 | 第34-35页 |
| ·ELISA结果判定标准的确定 | 第35页 |
| ·交叉反应 | 第35页 |
| ·与现有检测方法的比较 | 第35-36页 |
| ·间接ELISA的重复性实验 | 第36页 |
| ·LDH-ELISA的临床应用 | 第36-37页 |
| 5 讨论 | 第37-39页 |
| ·猪肺炎支原体 | 第37页 |
| ·猪肺炎支原体LDH基因的克隆表达 | 第37页 |
| ·本研究建立的LDH-ELISA方法 | 第37-38页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第38-39页 |
| ·试剂及酶标板的选择 | 第38页 |
| ·ELISA方法的判断标准 | 第38-39页 |
| 6 小结 | 第39-40页 |
| ·猪肺炎支原体乳酸脱氢酶LDH的克隆与表达 | 第39页 |
| ·以纯化的蛋白为抗原建立检测猪肺炎支原体抗体的间接ELIsA方法 | 第39-40页 |
| 第2章 猪肺炎支原体核苷酸还原酶(NRDF)基因的克隆 | 第40-46页 |
| 1 目的与意义 | 第40页 |
| 2 材料与方法 | 第40-42页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·菌株与质粒 | 第40页 |
| ·酶及主要试剂 | 第40页 |
| ·猪肺炎支原体培养基(A26)的制备 | 第40-41页 |
| ·引物 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-42页 |
| ·PCR模板的制备 | 第41页 |
| ·PCR扩增核苷酸还原酶nrdF基因 | 第41页 |
| ·DNA回收 | 第41页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第41页 |
| ·克隆质粒的构建 | 第41页 |
| ·质粒的小量制备 | 第41-42页 |
| ·DNA重组技术(DNA酶切、连接) | 第42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-45页 |
| ·猪肺炎支原体NRDF基因的PCR扩增 | 第42页 |
| ·克隆载体与表达载体的构建 | 第42-45页 |
| 4 讨论 | 第45页 |
| 5 小结 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-55页 |
| 略词表(ABBREVIATION) | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
