| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-32页 |
| ·有机磷农药简介 | 第10-16页 |
| ·有机磷农药发展现状 | 第10-11页 |
| ·有机磷酸酯类农药的种类 | 第11-13页 |
| ·有机磷酸酯类农药使用引起的环境问题 | 第13-16页 |
| ·对大气的污染 | 第13页 |
| ·对水体的污染 | 第13-14页 |
| ·对土壤的污染 | 第14页 |
| ·对农作物的污染 | 第14-15页 |
| ·对自然界各类动物的污染 | 第15页 |
| ·对人体的危害 | 第15-16页 |
| ·有机磷酸酯农药在土壤中的降解与转化 | 第16-19页 |
| ·有机磷酸酯农药的光降解 | 第17页 |
| ·有机磷酸酯农药的水解 | 第17-18页 |
| ·有机磷酸酯农药的微生物降解 | 第18-19页 |
| ·降解有机磷酸酯农药微生物 | 第19-22页 |
| ·降解有机磷酸酯农药微生物的类型 | 第19页 |
| ·降解有机磷酸酯农药微生物的种类 | 第19-22页 |
| ·降解农药的细菌 | 第19-21页 |
| ·降解农药的真菌 | 第21页 |
| ·降解农药的放线菌 | 第21-22页 |
| ·微生物降解有机磷酸酯农药的途径 | 第22-23页 |
| ·微生物降解农药的研究进展 | 第23-28页 |
| ·降解基因的克隆与表达 | 第23-25页 |
| ·降解有机磷农药的基因工程菌株的构建 | 第25-27页 |
| ·农药降解酶制剂和固相酶反应器的研制 | 第27-28页 |
| ·采用生物降解与其它降解机制相结合的降解系统 | 第28页 |
| ·实验室研究与大田应用相结合 | 第28页 |
| ·有机磷农药残留量主要分析方法 | 第28-30页 |
| ·薄层色谱法 | 第28-29页 |
| ·气相色谱法(GC) | 第29页 |
| ·气相色谱与质谱鉴定器联用分析法(GC／MS) | 第29页 |
| ·高效液相色谱法(HPLC) | 第29-30页 |
| ·高效液相色谱与质谱鉴定器联用分析法(HPLC／MS) | 第30页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第30-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-46页 |
| ·试验材料 | 第32-36页 |
| ·供试土样 | 第32页 |
| ·供试菌株及质粒 | 第32页 |
| ·试剂、培养基及常用溶液配方 | 第32-35页 |
| ·试剂 | 第32-33页 |
| ·培养基 | 第33-34页 |
| ·常用溶液配方 | 第34-35页 |
| ·仪器 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-46页 |
| ·降解有机磷酸酯农药细菌的分离筛选 | 第36-37页 |
| ·降解有机磷酸酯农药细菌驯化与分离 | 第36页 |
| ·限制性片段长度多态性(RFLP)筛选菌株 | 第36页 |
| ·筛选菌株对农药耐受能力的测定 | 第36-37页 |
| ·筛选菌株对乐果的降解能力的测定 | 第37页 |
| ·细菌的鉴定 | 第37-41页 |
| ·革兰氏染色与菌体形态的观察 | 第37-38页 |
| ·菌株X2总DNA的抽提 | 第38页 |
| ·16S rDNA序列PCR扩增 | 第38-39页 |
| ·PCR产物的回收 | 第39页 |
| ·16S rRNA基因序列BLAST比对及系统发育树的绘制 | 第39-40页 |
| ·生理生化实验 | 第40-41页 |
| ·抗生素敏感性实验 | 第41页 |
| ·菌株X2OD值生长曲线测定 | 第41-42页 |
| ·菌株X2降解能力的测定 | 第42页 |
| ·菌株X2降解乐果曲线 | 第42页 |
| ·降解其他有机磷农药实验 | 第42页 |
| ·pH对菌株X2生长的影响 | 第42页 |
| ·菌株X2的质粒研究 | 第42-43页 |
| ·大质粒(mega-plasmid)快检 | 第42-43页 |
| ·质粒快检 | 第43页 |
| ·鸟枪法克隆降解基因 | 第43-44页 |
| ·目的片断DNA的制备 | 第43页 |
| ·载体的制备 | 第43页 |
| ·连接反应 | 第43-44页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第44页 |
| ·转化 | 第44页 |
| ·重组子筛选和验证 | 第44-45页 |
| ·重组子质粒酶切验证 | 第44页 |
| ·重组子菌株验证 | 第44-45页 |
| ·重组子降解效率测定 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-63页 |
| ·降解有机磷酸酯农药细菌的分离筛选 | 第46-50页 |
| ·RFLP对降解细菌的筛选 | 第46-47页 |
| ·降解细菌对乐果和敌敌畏的耐受能力 | 第47-49页 |
| ·降解细菌对乐果的降解能力 | 第49-50页 |
| ·细菌鉴定 | 第50-54页 |
| ·革兰氏染色及菌落形态观察 | 第50页 |
| ·16S rDNA序列PCR扩增 | 第50-53页 |
| ·PCR扩增结果 | 第50-51页 |
| ·16S rRNA基因序列BLAST比对结果 | 第51-52页 |
| ·系统发育树 | 第52-53页 |
| ·生理生化实验 | 第53-54页 |
| ·抗生素敏感实验 | 第54-55页 |
| ·细菌OD值生长曲线的测定 | 第55页 |
| ·菌株X2降解效率的测定 | 第55-58页 |
| ·pH对X2生长的影响 | 第58页 |
| ·细菌质粒研究 | 第58-59页 |
| ·鸟枪法克隆降解基因 | 第59-61页 |
| ·重组子的筛选 | 第59页 |
| ·重组子的酶切验证 | 第59-61页 |
| ·重组子在乐果和敌敌畏中降解效率的测定 | 第61-63页 |
| 4 小结与讨论 | 第63-66页 |
| ·降解菌株的筛选和鉴定 | 第63-64页 |
| ·X2降解能力与降解途径 | 第64页 |
| ·鸟枪法克隆 | 第64-65页 |
| ·后续工作展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71页 |