| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-15页 |
| ·酵母转化研究进展 | 第8页 |
| ·根癌农杆菌介导的酵母遗传转化 | 第8-12页 |
| ·根癌农杆菌介导酿酒酵母遗传转化机理 | 第8-9页 |
| ·根癌农杆菌Ti 质粒载体系统的发展 | 第9-10页 |
| ·转基因酵母的遗传表达 | 第10-12页 |
| ·影响根癌农杆菌介导转化转化率的主要因素 | 第12页 |
| ·甘油及甘油的生产方法 | 第12页 |
| ·甘油的理化性质及主要用途 | 第12页 |
| ·甘油的主要生产方法 | 第12页 |
| ·发酵法生产甘油 | 第12页 |
| ·产甘油假丝酵母的研究进展 | 第12-13页 |
| ·酵母合成甘油关键酶的研究 | 第13页 |
| ·本研究的立题背景和内容 | 第13-15页 |
| 第二章 根癌农杆菌介导酿酒酵母的遗传转化 | 第15-21页 |
| ·材料和方法 | 第15-17页 |
| ·菌株和质粒 | 第15页 |
| ·工具酶和试剂 | 第15-16页 |
| ·培养基 | 第16页 |
| ·根癌农杆菌的转化 | 第16页 |
| ·根癌农杆菌Ti 质粒转化酿酒酵母 | 第16-17页 |
| ·酿酒酵母阳性转化子的表型验证 | 第17页 |
| ·酿酒酵母阳性转化子染色体DNA 的提取及PCR 验证 | 第17页 |
| ·转化子遗传稳定性验证 | 第17页 |
| ·结果与讨论 | 第17-20页 |
| ·质粒pCAM 3300-URA3 的构建及酶切验证 | 第17页 |
| ·根癌农杆菌阳性转化子获得 | 第17页 |
| ·酿酒酵母阳性转化子的获得及初步鉴定 | 第17-19页 |
| ·酿酒酵母阳性转化子PCR 鉴定 | 第19-20页 |
| ·酿酒酵母阳性转化子稳定性鉴定 | 第20页 |
| ·本章主要结论 | 第20-21页 |
| 第三章 根癌农杆菌介导产甘油假丝酵母的遗传转化 | 第21-28页 |
| ·材料与方法 | 第21-23页 |
| ·菌株和质粒 | 第21页 |
| ·工具酶和试剂 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·根癌农杆菌的转化 | 第22页 |
| ·根癌农杆菌Ti 质粒转化产甘油假丝酵母 | 第22页 |
| ·产甘油假丝酵母阳性转化子表型验证 | 第22页 |
| ·产甘油假丝酵母阳性转化子染色体DNA 的提取及PCR 验证 | 第22页 |
| ·产甘油假丝酵母遗传稳定性验证 | 第22-23页 |
| ·转化条件优化策略 | 第23页 |
| ·结果与讨论 | 第23-27页 |
| ·质粒pCAM 3300-Zeocin 的构建及酶切验证 | 第23页 |
| ·根癌农杆菌阳性转化子的获得 | 第23-24页 |
| ·产甘油假丝酵母转化子的获得及初步鉴定 | 第24页 |
| ·产甘油假丝酵母转化子PCR 验证 | 第24-25页 |
| ·转化条件优化结果 | 第25-27页 |
| ·转化子遗传稳定性鉴定 | 第27页 |
| ·本章主要结论 | 第27-28页 |
| 第四章 根癌农杆菌介导产甘油关键酶基因GPD1 转化产甘油假丝酵母及其表达 | 第28-40页 |
| ·材料与方法 | 第28-31页 |
| ·菌株和质粒 | 第28页 |
| ·工具酶和试剂 | 第28-29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| ·酿酒酵母GPD1 基因的克隆 | 第29页 |
| ·根癌农杆菌转化 | 第29页 |
| ·根癌农杆菌Ti 质粒转化产甘油假丝酵母 | 第29页 |
| ·产甘油假丝酵母阳性转化子表型验证 | 第29页 |
| ·产甘油假丝酵母阳性转化子染色体DNA 提取和PCR 验证 | 第29页 |
| ·转化子发酵产甘油能力筛选 | 第29页 |
| ·发酵过程参数分析 | 第29-30页 |
| ·发酵液中甘油含量的测定 | 第30-31页 |
| ·残糖测定 | 第31页 |
| ·生物量的测定 | 第31页 |
| ·粗酶液的制备 | 第31页 |
| ·酶蛋白定量 | 第31页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶酶活测定 | 第31页 |
| ·结果与讨论 | 第31-38页 |
| ·酿酒酵母GPD1 全长基因的克隆 | 第31页 |
| ·质粒pCAM 3300-Zeocin-GPD1 的构建及酶切验证 | 第31-34页 |
| ·产甘油假丝酵母阳性转化子获得 | 第34页 |
| ·产甘油假丝酵母转化子PCR 验证 | 第34页 |
| ·高产甘油阳性转化子的筛选 | 第34-35页 |
| ·GPD1 插入对C.g-G10 生长的影响 | 第35-36页 |
| ·转化子C.g-G10 发酵参数的时序变化 | 第36-38页 |
| ·讨论 | 第38页 |
| ·本章主要结论 | 第38-40页 |
| 第五章 C.G-G10 发酵性状及稳定性研究 | 第40-45页 |
| ·材料和方法 | 第40页 |
| ·菌株 | 第40页 |
| ·培养基 | 第40页 |
| ·发酵方法 | 第40页 |
| ·分析方法 | 第40页 |
| ·C.g-G10 传代稳定性验证 | 第40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-44页 |
| ·KH_2PO_4 对C.g-G10 产甘油发酵的影响 | 第40-41页 |
| ·玉米浆对C.g-G10 产甘油发酵的影响 | 第41-42页 |
| ·KH_2PO_4 和玉米浆对C.g-G10 产甘油发酵影响的讨论 | 第42-43页 |
| ·C.g-G10 的传代稳定性研究 | 第43-44页 |
| ·本章主要结论 | 第44-45页 |
| 主要结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
