| 摘 要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-27页 |
| 第二章 β－琼胶酶 AgaB 重组表达质粒的构建及鉴定 | 第27-37页 |
| 1 引言 | 第27-28页 |
| 2 实验材料与方法 | 第28-35页 |
| ·实验材料 | 第28-29页 |
| ·实验仪器 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-35页 |
| ·引物设计与合成 | 第29页 |
| ·PCR 扩增 | 第29-30页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第30页 |
| ·PCR 产物的酶切及纯化 | 第30-31页 |
| ·pBV220 载体质粒的制备 | 第31-32页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接 | 第32页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·转化用LB 平板的制备 | 第32页 |
| ·连接产物的转化 | 第32-33页 |
| ·重组质粒载体的制备 | 第33-34页 |
| ·重组子的筛选 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的序列测定及分析 | 第35页 |
| 3 结果与讨论 | 第35-37页 |
| ·agaB 基因的PCR 扩增 | 第35页 |
| ·pBV220 载体质粒的制备 | 第35-36页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的测序 | 第37页 |
| 第三章β－琼胶酶agaB 基因的重组表达及表达产物的检测 | 第37-42页 |
| 1 引言 | 第37-38页 |
| 2 实验材料与方法 | 第38-39页 |
| ·实验材料 | 第38页 |
| ·实验仪器 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-39页 |
| ·agaB 基因表达宿主的选择 | 第38页 |
| ·agaB 基因的优化表达 | 第38-39页 |
| ·表达产物的检测－SDS-PAGE 电泳 | 第39页 |
| 3 结果与讨论 | 第39-42页 |
| ·agaB 基因表达宿主的选择 | 第39-40页 |
| ·agaB 基因的优化表达 | 第40-41页 |
| ·鉴定琼胶酶AgaB 存在于包涵体中 | 第41-42页 |
| 第四章 目的蛋白包涵体的制备 | 第42-47页 |
| 1 引言 | 第42-43页 |
| 2 实验材料和方法 | 第43-44页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·实验仪器 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-44页 |
| ·菌体收集与破碎 | 第43页 |
| ·包涵体的洗涤 | 第43-44页 |
| ·包涵体的溶解 | 第44页 |
| ·变性蛋白的纯化 | 第44页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第44-47页 |
| ·重组琼胶酶AgaB 包涵体的洗涤纯化和溶解 | 第44-46页 |
| ·变性蛋白的亲和层析纯化 | 第46-47页 |
| 第五章 重组琼胶酶 AgaB 的复性工艺研究 | 第47-53页 |
| 1 引言 | 第47-48页 |
| 2 实验材料与方法 | 第48-50页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·实验仪器 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-50页 |
| ·包涵体溶解条件的选择 | 第48页 |
| ·重组琼胶酶AgaB 复性条件的选择 | 第48-49页 |
| ·酶活力的测定 | 第49-50页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第50-53页 |
| ·包涵体的溶解 | 第50-51页 |
| ·重组AgaB 的复性 | 第51-53页 |
| 第六章 复性后重组 AgaB 的生物学活性分析 | 第53-59页 |
| 1 引言 | 第53页 |
| 2 实验材料与方法 | 第53-56页 |
| ·实验材料 | 第53页 |
| ·实验仪器 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-56页 |
| ·酶学性质分析 | 第54页 |
| ·薄层层析（Thin－layer chromatography TLC） | 第54-55页 |
| ·荧光辅助碳水化合物电泳（FACE） | 第55-56页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第56-59页 |
| ·复性蛋白酶学性质分析 | 第56-57页 |
| ·降解活性 | 第57-59页 |
| 第五部分 总结与展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
