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卵丘细胞对小鼠卵母细胞胞质成熟的作用及机理的研究

中文摘要第1-13页
ABSTRACT第13-15页
1 前言第15-30页
   ·卵母细胞的成熟第15-16页
   ·卵丘细胞在卵母细胞成熟、排卵和受精过程中的作用第16-18页
     ·卵丘细胞在卵母细胞成熟过程中的作用第16-17页
     ·卵丘细胞对排卵的作用第17页
     ·卵丘细胞在卵母细胞受精过程中的作用第17-18页
   ·卵母细胞体外成熟共培养体系的研究进展第18-19页
   ·标示卵母细胞胞质成熟质量的其它指标第19-30页
     ·卵母细胞的MPF 活性变化第20-21页
     ·卵母细胞中的谷胱甘肽第21-24页
       ·GSH 在卵母细胞成熟、受精及早期胚胎发育过程中的作用第21-23页
       ·哺乳动物卵母细胞成熟过程和受精后GSH 水平变化第23页
       ·成熟环境和卵丘细胞对卵母细胞GSH 合成的影响第23-24页
     ·卵母细胞的皮质颗粒迁移及胞吐第24-26页
       ·哺乳动物卵母细胞成熟过程中CGs 迁移和重新分布第24-25页
       ·影响CGs 迁移和重分布的因素第25-26页
       ·CGs 胞吐与卵母细胞受精及透明带硬化第26页
     ·卵母细胞的纺锤体组装第26-28页
     ·卵母细胞的线粒体重分布第28-30页
2. 材料与方法第30-38页
   ·主要试剂及配制第30-31页
   ·实验动物及超排处理第31页
   ·卵母细胞的获取及体外成熟第31-32页
   ·体内成熟卵母细胞的获取第32页
   ·体细胞单层的制备及共培养第32-33页
     ·卵丘颗粒细胞单层的培养第32页
     ·壁颗粒细胞单层的培养第32页
     ·小鼠胎儿成纤维细胞单层的培养第32页
     ·小鼠输卵管上皮细胞单层的培养第32-33页
     ·体细胞单层与卵母细胞共培养第33页
   ·卵丘细胞条件化培养液的制备第33页
   ·卵母细胞的孤雌激活第33页
     ·乙醇结合6-DMAP 激活第33页
     ·氯化锶激活第33页
   ·卵母细胞的体外受精第33-34页
   ·胚胎培养第34页
   ·卵母细胞的核进程观察第34页
   ·透明带硬化测试第34页
   ·MPF 活性检测第34-35页
     ·实验材料的制备第34页
     ·蛋白磷酸化反应第34页
     ·SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳第34-35页
     ·放射自显影第35页
     ·MPF 活性的定量研究第35页
   ·卵母细胞谷胱甘肽含量的测定第35页
   ·皮质颗粒染色第35页
   ·卵母细胞纺锤体(Α-微管蛋白)染色第35-36页
   ·卵母细胞线粒体染色第36页
   ·激光扫描共聚焦显微术第36页
   ·实验设计第36-37页
     ·小鼠裸卵体外成熟模型的建立第36页
       ·超排处理时间不同对卵母细胞体外成熟的影响第36页
       ·体外成熟卵母细胞最佳激活方案及激活卵龄的研究第36页
     ·卵丘细胞共培养对小鼠裸卵体外成熟及发育能力的改善第36-37页
       ·超排处理时间及卵丘细胞共培养对卵母细胞(COCs、DOs)体外成熟及发育的影响第36页
       ·卵丘颗粒细胞条件化培养液对卵母细胞体外成熟及发育的影响第36-37页
       ·卵丘卵母细胞共培养体系中卵丘细胞存在方式及卵丘细胞密度对卵母细胞成熟及发育的影响第37页
       ·不同体细胞类型共培养对小鼠裸卵成熟及发育的影响第37页
       ·体细胞培养液或卵母细胞成熟培养液中是否添加促性腺激素对小鼠裸卵成熟和发育的影响第37页
       ·卵丘细胞共培养对卵母细胞体外受精及透明带硬化程度的影响第37页
     ·能够反应卵母细胞胞质成熟质量的其它细胞器及激酶活性检测第37页
   ·数据统计分析第37-38页
3. 结果与分析第38-54页
   ·小鼠裸卵体外成熟模型的建立第38-40页
     ·小鼠卵母细胞体外培养成熟时间的研究第38-39页
     ·体外成熟小鼠卵母细胞最佳激活方案及激活卵龄的研究第39-40页
   ·卵丘细胞共培养改善小鼠裸卵体外成熟及发育能力第40-47页
     ·超排处理时间及卵丘细胞共培养对卵母细胞(COCs、DOs)体外成熟及发育的影响第40-41页
     ·卵丘颗粒细胞及壁颗粒细胞条件化培养液对小鼠卵母细胞体外成熟、孤雌激活及胚胎发育的影响第41-42页
     ·共培养系统中卵丘细胞类型及细胞密度对卵母细胞成熟、激活及发育的影响第42-43页
     ·不同类型体细胞共培养对小鼠裸卵成熟及发育的影响第43-44页
     ·卵丘细胞培养液或卵母细胞成熟培养液中是否添加促性腺激素(PMSG),对卵母细胞体外成熟及发育的影响第44-45页
     ·卵丘细胞共培养对卵母细胞体外受精及透明带硬化的影响第45-47页
   ·能够反映卵母细胞胞质成熟质量的其它细胞器及激酶活性检测第47-54页
     ·卵母细胞核进程的变化第47-49页
     ·卵母细胞皮质颗粒(CGs)重分布及胞吐情况的研究第49页
     ·体内和体外成熟卵母细胞MPF 活性检测第49-51页
     ·体内和体外成熟卵母细胞的谷胱甘肽含量检测第51-52页
     ·体内和体外成熟卵母细胞的纺锤体组装第52-53页
     ·体内和体外成熟卵母细胞的线粒体分布第53-54页
4 讨论第54-59页
   ·卵丘细胞对卵母细胞成熟和发育的影响第54页
   ·卵丘细胞与卵母细胞之间的缝隙连接及卵丘细胞密度对卵母细胞成熟和发育的影响第54-55页
   ·卵丘细胞产生的促卵母细胞胞质成熟作用具有促性腺激素依赖性第55页
   ·卵母细胞的 GSH 含量变化第55-56页
   ·卵丘细胞共培养能显著提高 DOS 的受精能力第56页
   ·卵丘细胞共培养对DOs核成熟进程、MPF活性、纺睡体组装及线粒体分布的影响第56-59页
5 结论第59-61页
参考文献第61-73页
附录:图版及图版说明第73-78页
致谢第78-79页
作者简介及发表论文情况第79页

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