| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第8-14页 |
| 第一部分 文献综述及选题目的 | 第14-20页 |
| 第一章 疱疹病毒gC基因及其编码蛋白的研究进展 | 第14-20页 |
| 1 疱疹病毒gC基因及gC蛋白的特点 | 第14-15页 |
| ·gC基因特点 | 第14页 |
| ·gC基因编码蛋白特点 | 第14-15页 |
| 2 gC蛋白的功能 | 第15-17页 |
| ·gC介导病毒吸附细胞 | 第15-16页 |
| ·gC的补体调节特性 | 第16页 |
| ·gC与病毒毒力 | 第16-17页 |
| 3 gC蛋白的免疫原性及DNA疫苗策略的应用 | 第17-18页 |
| ·gC蛋白与病毒免疫 | 第17页 |
| ·基于gC基因的DNA疫苗研究 | 第17-18页 |
| 4 展望 | 第18页 |
| 5 选题目的 | 第18-20页 |
| 第二部分 试验研究 | 第20-61页 |
| 第二章 鸭瘟病毒体外感染宿主细胞gC基因转录时相分析 | 第20-32页 |
| 1 试验材料 | 第20-21页 |
| ·毒株 | 第20页 |
| ·试验动物 | 第20页 |
| ·主要试验仪器 | 第20-21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要溶液配制 | 第21页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳相关溶液 | 第21页 |
| ·制备鸭胚成纤维细胞相关溶液 | 第21页 |
| ·其他 | 第21页 |
| 2 试验方法 | 第21-24页 |
| ·鸭胚成纤维细胞的制备和病毒感染 | 第21-22页 |
| ·总RNA的提取 | 第22页 |
| ·RNA完整性及纯度分析 | 第22页 |
| ·cDNA合成 | 第22-23页 |
| ·引物设计与合成 | 第23页 |
| ·引物的特异性检测 | 第23页 |
| ·标准品的制备 | 第23页 |
| ·FQ-PCR标准曲线的制作 | 第23-24页 |
| ·样品的定量检测 | 第24页 |
| ·FQ-PCR结果分析 | 第24页 |
| 3 结果 | 第24-30页 |
| ·RNA完整性及纯度分析 | 第24-25页 |
| ·引物验证 | 第25页 |
| ·FQ-PCR标准曲线的制作 | 第25-30页 |
| ·gC基因标准曲线的制作 | 第25-27页 |
| ·β-actin基因FQ-PCR标准曲线的制作 | 第27-28页 |
| ·FQ-PCR对DPV gC基因的定量检测 | 第28-29页 |
| ·FQ-PCR数据统计分析 | 第29-30页 |
| 4 讨论 | 第30-32页 |
| ·荧光定量PCR技术 | 第30-31页 |
| ·DPV gC基因的转录谱特征 | 第31-32页 |
| 第三章 鸭瘟病毒体外感染宿主细胞gC基因表达时相分析 | 第32-37页 |
| 1 试验材料 | 第32-33页 |
| ·毒株 | 第32页 |
| ·试验动物 | 第32页 |
| ·主要试验仪器 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32-33页 |
| ·主要溶液配制 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE电泳溶液 | 第33页 |
| ·Westem Blot相关溶液 | 第33页 |
| ·细胞蛋白提取溶液 | 第33页 |
| ·制备鸭胚成纤维细胞相关溶液 | 第33页 |
| 2 试验方法 | 第33-34页 |
| ·鸭胚成纤维细胞的制备与病毒感染 | 第33页 |
| ·细胞蛋白的提取 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE | 第33页 |
| ·Western Blot检测 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| ·Western Blot技术 | 第35页 |
| ·DPV gC基因表达谱特征 | 第35-37页 |
| 第四章 鸭瘟病毒gC基因产物的亚细胞定位分析 | 第37-42页 |
| 1 试验材料 | 第37-38页 |
| ·毒株 | 第37页 |
| ·细胞 | 第37页 |
| ·主要试验仪器 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·主要溶液配制 | 第37-38页 |
| 2 试验方法 | 第38-39页 |
| ·间接免疫荧光(IFA)检测DPV gC基因产物亚细胞定位方法的建立及条件优化 | 第38-39页 |
| ·IFA检测DPV gC基因产物亚细胞定位方法的建立 | 第38页 |
| ·条件优化 | 第38页 |
| ·特异性检测 | 第38-39页 |
| ·结果判定 | 第39页 |
| ·DPV gC基因产物亚细胞定位检测 | 第39页 |
| 3 结果 | 第39-41页 |
| ·IFA检测DPV gC基因产物亚细胞定位方法的建立及条件优化 | 第39页 |
| ·条件优化结果 | 第39页 |
| ·特异性试验 | 第39页 |
| ·DPV gC基因产物亚细胞定位检测 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-42页 |
| ·关于蛋白定位研究方法 | 第41页 |
| ·DPV gC在宿主亚细胞中的定位分析 | 第41-42页 |
| 第五章 鸭瘟病毒gC基因疫苗诱导实验鸭免疫发生的研究 | 第42-61页 |
| 1 试验材料 | 第42-44页 |
| ·毒株/质粒/疫苗 | 第42页 |
| ·实验动物 | 第42-43页 |
| ·主要试验仪器 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·试剂的配制 | 第43-44页 |
| ·MTT相关试剂 | 第43页 |
| ·ELISA相关试剂 | 第43-44页 |
| 2 试验方法 | 第44-48页 |
| ·基因枪"子弹"的准备 | 第44页 |
| ·动物分组和免疫 | 第44-45页 |
| ·血样的采集 | 第45页 |
| ·T淋巴细胞转化试验 | 第45页 |
| ·CD4~+、CD8~+T淋巴细胞亚群数量的检测 | 第45-46页 |
| ·血清抗体水平的检测 | 第46-47页 |
| ·ELISA抗原的制备 | 第46页 |
| ·酶标抗体工作浓度的确定 | 第46页 |
| ·抗原最适包被浓度和样本最佳稀释度的选择 | 第46页 |
| ·间接ELISA基本操作程序 | 第46-47页 |
| ·中和抗体水平的检测 | 第47-48页 |
| ·细胞培养半数感染量(TCID50)的测定 | 第47页 |
| ·中和试验 | 第47-48页 |
| 3 结果 | 第48-55页 |
| ·pcDNA-DPV-gC以不同途径、不同剂量免疫与DPV弱毒疫苗免疫后鸭外周血T淋巴细胞转化效果 | 第48-50页 |
| ·不同剂量pcDNA-DPV-gC基因枪轰击与DPV弱毒疫苗免疫后鸭外周血T淋巴细胞转化效果 | 第48页 |
| ·不同剂量pcDNA-DPV-gC肌肉注射与DPV弱毒疫苗免疫后鸭外周血T淋巴细胞转化效果 | 第48-49页 |
| ·不同途径免疫pcDNA-DPV-gC后鸭外周血T淋巴细胞转化效果 | 第49-50页 |
| ·pcDNA-DPV-gC以不同途径、不同剂量免疫与DPV弱毒疫苗免疫后鸭外周血CD4~+、CD8~+T淋巴细胞数量变化 | 第50-54页 |
| ·不同剂量pcDNA-DPV-gC基因枪轰击与DPV弱毒疫苗免疫后鸭外周血CD4~+、CD8~+T淋巴细胞数量的变化 | 第50-51页 |
| ·不同剂量pcDNA-DPV-gC基因枪轰击与DPV弱毒疫苗免疫后鸭外周血CD4~+T淋巴细胞数量的变化 | 第50页 |
| ·不同剂量pcDNA-DPV-gC基因枪轰击与DPV弱毒疫苗免疫后鸭外周血CD8~+T淋巴细胞数量的变化 | 第50-51页 |
| ·不同剂量pcDNA-DPV-gC肌肉注射与DPV弱毒疫苗免疫后鸭外周血CD4~+、CD8~+T淋巴细胞数量的变化 | 第51-52页 |
| ·不同剂量pcDNA-DPV-gC肌肉注射与DPV弱毒疫苗免疫后鸭外周血CD4~+T淋巴细胞数量的变化 | 第51页 |
| ·不同剂量pcDNA-DPV-gC肌肉注射与DPV弱毒疫苗免疫后鸭外周血CD8~+T淋巴细胞数量的变化 | 第51-52页 |
| ·不同途径免疫pcDNA-DPV-gC后鸭外周血CD4~+、CD8~+T淋巴细胞数量的变化 | 第52-54页 |
| ·不同途径免疫pcDNA-DPV-gC和DPV弱毒疫苗免疫后鸭外周血CD4~+T淋巴细胞数量变化 | 第52页 |
| ·不同途径免疫pcDNA-DPV-gC与DPV弱毒疫苗免疫后鸭外周血CD8~+T淋巴细胞数量变化 | 第52-54页 |
| ·pcDNA-DPV-gC以不同途径、不同剂量免疫与DPV弱毒疫苗免疫后鸭血清抗体水平变化 | 第54-55页 |
| ·不同剂量pcDNA-DPV-gC基因枪轰击与DPV弱毒疫苗免疫后鸭血清抗体水平的变化 | 第54页 |
| ·肌肉注射不同剂量pcDNA-DPV-gC与DPV弱毒疫苗免疫后鸭血清抗体水平的变化 | 第54页 |
| ·不同途径免疫pcDNA-DPV-gC后鸭血清抗体水平的变化 | 第54-55页 |
| ·pcDNA-DPV-gC以不同途径、不同剂量免疫与DPV弱毒疫苗免疫后鸭血清中和抗体水平变化 | 第55页 |
| ·鸭瘟细胞毒TCID_(50)的测定 | 第55页 |
| ·不同剂量pcDNA-DPV-gC基因枪注射、肌肉注射和DPV弱毒疫苗免疫后鸭血清中和抗体水平的变化 | 第55页 |
| 4 讨论 | 第55-61页 |
| ·基于gC的基因疫苗应用 | 第56页 |
| ·基因疫苗和弱毒疫苗免疫后鸭外周血T淋巴细胞转化效果 | 第56-57页 |
| ·基因疫苗和弱毒疫苗免疫后鸭外周血CD4~+和CD8~+T淋巴细胞动态变化 | 第57页 |
| ·基因疫苗和弱毒疫苗免疫后鸭血清抗体IgG的动态变化 | 第57-58页 |
| ·基因疫苗和弱毒疫苗免疫后鸭血清中和抗体的动态变化 | 第58页 |
| ·不同免疫途径对pcDNA-DPV-gC免疫效果的影响 | 第58-59页 |
| ·不同免疫剂量对pcDNA-DPV-gC免疫效果的影响 | 第59-61页 |
| 第三部分 结论 | 第61-62页 |
| 附表 | 第62-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第72页 |
