| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 缩略词语表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-41页 |
| 第一节 腮腺分泌蛋白的相关研究 | 第12-23页 |
| 1.唾液腺的组织结构 | 第12页 |
| 2.唾液的成分及功能 | 第12-13页 |
| 3.在唾液腺开展的相关研究 | 第13-17页 |
| ·癌症研究 | 第13-14页 |
| ·唾液腺介导的基因治疗 | 第14-15页 |
| ·免疫方面 | 第15页 |
| ·唾液生物反应器的研究 | 第15-16页 |
| ·生物制药及疾病防治 | 第16-17页 |
| 4.腮腺分泌蛋白的研究进展 | 第17-23页 |
| ·各物种PSP基因的发现 | 第17-20页 |
| ·PSP与其它蛋白的关系 | 第20页 |
| ·影响腮腺分泌蛋白表达的因素 | 第20-21页 |
| ·腮腺分泌蛋白的表达调控 | 第21-23页 |
| 第二节 真核基因转录调控元件研究的策略与方法 | 第23-29页 |
| 1 基因调控分析的首要步骤 | 第23-24页 |
| 2 转录起始位点的定位 | 第24-26页 |
| ·引物延伸 | 第24-25页 |
| ·Rnase保护 | 第25页 |
| ·S1核酸酶分析 | 第25页 |
| ·cDNA末端的快速扩增(RACE) | 第25-26页 |
| 3 启动子的功能性分析 | 第26-27页 |
| ·瞬时转染分析法 | 第26页 |
| ·稳定转染分析 | 第26-27页 |
| ·其它方法 | 第27页 |
| 4 常用的报告基因 | 第27-29页 |
| 第三节 Q-PCR技术的原理及应用 | 第29-41页 |
| 1.实时荧光定量PCR技术的原理简介 | 第29-36页 |
| ·实时荧光定量PCR技术的相关参数 | 第30页 |
| ·荧光定量PCR的探针标记技术 | 第30-33页 |
| ·实时荧光定量PCR技术的参照物 | 第33-34页 |
| ·绝对定量和相对定量 | 第34-35页 |
| ·荧光PCR的特点 | 第35-36页 |
| 2.荧光定量PCR的应用 | 第36-41页 |
| ·基因表达的研究 | 第36页 |
| ·免疫组份分析 | 第36-37页 |
| ·基因突变及其多态性 | 第37页 |
| ·肿瘤研究 | 第37-38页 |
| ·病原体测定 | 第38-39页 |
| ·单基因病的诊断 | 第39页 |
| ·法医学应用 | 第39页 |
| ·转基因植物产品检测 | 第39-40页 |
| ·发展趋势及应用前景 | 第40-41页 |
| 第二章 腮腺生后发育中PSP及A-AMY的表达 | 第41-87页 |
| 第一节 材料与方法 | 第41-56页 |
| 1 试验材料 | 第41-44页 |
| ·实验动物 | 第41页 |
| ·主要仪器 | 第41-42页 |
| ·实验用酶 | 第42页 |
| ·其它药品及试剂 | 第42页 |
| ·试剂的配制 | 第42-44页 |
| 2 实验方法 | 第44-56页 |
| ·组织样的采集 | 第44页 |
| ·总RNA的提取 | 第44-45页 |
| ·引物设计 | 第45-46页 |
| ·RT-PCR检测 | 第46-48页 |
| ·定量PCR分析 | 第48页 |
| ·Northern杂交 | 第48-51页 |
| ·兔抗猪PSP抗血清的制备 | 第51-52页 |
| ·酶联免疫吸附实验(ELISA)测定抗体效价 | 第52-53页 |
| ·腮腺组织总蛋白的提取及定量 | 第53-54页 |
| ·PAGE胶的制备电泳及考马氏亮蓝染色 | 第54-56页 |
| 第二节 结果与分析 | 第56-84页 |
| 1 猪腮腺生后发育中PSP与AMY的表达 | 第56-73页 |
| ·总RNA的提取 | 第56-57页 |
| ·RT-PCR检测PSP、AMY的表达 | 第57-60页 |
| ·荧光定量PCR检测PSP、AMY的表达 | 第60-65页 |
| ·Northern blot检测mRNA丰度 | 第65-67页 |
| ·PSP抗原决定簇分析及抗体效价检测 | 第67-69页 |
| ·WESTERN BLOT检测猪PSP及AMY的表 | 第69-71页 |
| ·SDS-PAGE蛋白表达量的分析 | 第71-73页 |
| 2 小鼠腮腺生后发育中PSP与AMY的表达 | 第73-83页 |
| ·总RNA的提取 | 第73页 |
| ·RT-PCR检测基因表达量 | 第73-75页 |
| ·荧光定量PCR检测PSP及AMY的表达 | 第75-77页 |
| ·Northern blot检测mRNA丰度 | 第77-79页 |
| ·Western blot | 第79-81页 |
| ·SDS-PAGE蛋白表达量的分析 | 第81-83页 |
| 3 猪与小鼠PSP、AMY表达情况比较 | 第83-84页 |
| 第三节 小结与讨论 | 第84-87页 |
| 第三章 猪PSP转录起始点定位及启动子定位载体构建 | 第87-117页 |
| 第一节 材料与方法 | 第87-102页 |
| 1 试验材料 | 第87-90页 |
| ·实验动物 | 第87页 |
| ·菌株，细胞系和载体 | 第87页 |
| ·主要仪器 | 第87-88页 |
| ·药品及试剂 | 第88页 |
| ·试剂的配制 | 第88-90页 |
| 2 实验方法 | 第90-102页 |
| ·5’RACE程序 | 第91-93页 |
| ·pMD-T18载体的连接反应 | 第93页 |
| ·感受态细胞的制备、效价的测定及质粒DNA的转化 | 第93-95页 |
| ·重组质粒的快速鉴定Cracking法 | 第95页 |
| ·质粒DNA或粘粒DNA的小量制备 | 第95-96页 |
| ·质粒DNA或粘粒DNA的大量制备及纯化(碱裂解法) | 第96-97页 |
| ·BAC的提取方法(醋酸钾法) | 第97-99页 |
| ·外源片段的回收 | 第99页 |
| ·载体改造接头的设计及预处理 | 第99页 |
| ·猪PSP基因启动子片段扩增引物 | 第99-100页 |
| ·组织样的采集 | 第100页 |
| ·腮腺组织的培养 | 第100页 |
| ·脂质体转染法导入外源基因 | 第100-102页 |
| 第二节 结果与分析 | 第102-115页 |
| 1.PSP转录起始位点的定位 | 第102-104页 |
| ·总RNA的提取 | 第102页 |
| ·5′RACE确定猪PSP基因转录起始位点 | 第102-104页 |
| 2.启动子定位载体的构建 | 第104-111页 |
| ·质粒pEGFP-N1的改造 | 第104-105页 |
| ·PSP启动子的预测 | 第105-107页 |
| ·启动子定位载体的构建 | 第107-111页 |
| 3 猪原代细胞的培养及转染条件的确定 | 第111-115页 |
| ·猪腮腺原代细胞的培养 | 第111-112页 |
| ·细胞转染条件的确定 | 第112-115页 |
| 第三节 小结与讨论 | 第115-117页 |
| 1 关于5′RACE | 第115-116页 |
| 2 关于Inr元件与TATA box的比较 | 第116页 |
| 3 关于载体的构建 | 第116-117页 |
| 第四章 结论 | 第117-118页 |
| 主要参考文献 | 第118-128页 |
| 个人简历 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129页 |
