| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-49页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎流行及其危害 | 第16-19页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎流行现状 | 第16-17页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎传播途径 | 第17-18页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎危害 | 第18-19页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎病原学 | 第19-27页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌分类、理化性质及生长特性 | 第19-20页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌抗原与血清型 | 第20-21页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌主要毒力因子致病性及免疫原性研究进展 | 第21-26页 |
| ·荚膜 | 第21-22页 |
| ·脂多糖 | 第22-23页 |
| ·外膜蛋白 | 第23页 |
| ·转铁结合蛋白 | 第23-24页 |
| ·蛋白酶 | 第24页 |
| ·外毒素 | 第24-26页 |
| ·黏附因子 | 第26页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌致病机理 | 第26-27页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎临床症状 | 第27-28页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎病理学特征 | 第28页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎诊断方法研究进展 | 第28-33页 |
| ·病原学诊断方法 | 第28-29页 |
| ·血清学诊断方法 | 第29-33页 |
| ·补体结合试验 | 第29-30页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第30页 |
| ·凝集试验 | 第30-31页 |
| ·环状沉淀试验 | 第31页 |
| ·间接血凝试验 | 第31页 |
| ·间接荧光抗体试验 | 第31-32页 |
| ·乳胶凝集试验 | 第32页 |
| ·免疫扩散试验 | 第32-33页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎防制 | 第33-34页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌毒素研究进展 | 第34-38页 |
| ·毒素名称和种类 | 第34页 |
| ·毒素分泌、基因结构、表达与调控及其作用 | 第34-38页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎疫苗研究进展 | 第38-46页 |
| ·传统疫苗 | 第39-41页 |
| ·灭活疫苗 | 第39页 |
| ·亚单位疫苗 | 第39-41页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎新型疫苗研究现状 | 第41-46页 |
| ·ghosts疫苗 | 第41-42页 |
| ·口服疫苗 | 第42-43页 |
| ·弱毒疫苗 | 第43-46页 |
| ·负向选择方法 | 第46-49页 |
| ·负向选择标记在细菌遗传学和病原学研究的作用 | 第46-47页 |
| ·负向选择标记种类 | 第47-49页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第49-51页 |
| 第3章 材料与方法 | 第51-65页 |
| ·试验材料 | 第51-58页 |
| ·细菌菌株 | 第51页 |
| ·载体与质粒 | 第51-53页 |
| ·主要药品和试剂 | 第53页 |
| ·主要培养基和抗生素 | 第53-55页 |
| ·本研究中所用的寡核苷酸引物 | 第55页 |
| ·缓冲液 | 第55-57页 |
| ·质粒提取用缓冲液 | 第55-56页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液 | 第56页 |
| ·Western blot缓冲液 | 第56页 |
| ·ELISA缓冲液 | 第56-57页 |
| ·Southern blot缓冲液 | 第57页 |
| ·细菌基因组DNA提取试剂 | 第57页 |
| ·大肠杆菌感受态制备用试剂 | 第57页 |
| ·其它缓冲液及试剂 | 第57-58页 |
| ·实验动物 | 第58页 |
| ·试验方法 | 第58-65页 |
| ·细菌活化 | 第58页 |
| ·细菌基因组DNA提取 | 第58页 |
| ·PCR或酶切产物的回收与纯化 | 第58-59页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第59页 |
| ·连接产物及质粒的转化 | 第59页 |
| ·重组质粒快速鉴定 | 第59页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第59页 |
| ·质粒的小量制备 | 第59-60页 |
| ·质粒的大量制备 | 第60页 |
| ·连接产物及质粒的转化 | 第60-61页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌电转化 | 第61页 |
| ·负向选择 | 第61页 |
| ·溶血性试验 | 第61页 |
| ·生长特性试验 | 第61-62页 |
| ·Southern-blot | 第62-63页 |
| ·Western-blot | 第63页 |
| ·细菌计数和半数致死量(LD_(50)) | 第63-64页 |
| ·ApxⅡ-ELISA检测方法的建立 | 第64页 |
| ·天然毒素ApxⅡ的提取 | 第64页 |
| ·ApxⅡ抗原最佳包被浓度的选择 | 第64页 |
| ·ELISA阴阳性判定标准的确定 | 第64页 |
| ·全菌抗体检测 | 第64-65页 |
| 第4章 结果与分析 | 第65-89页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌外膜脂蛋白(omlA)基因启动子序列鉴定 | 第65-67页 |
| ·omlA启动子序列PCR扩增 | 第65页 |
| ·绿色荧光蛋白(GFP)基因PCR扩增和重组质粒pSKOGFP构建 | 第65-67页 |
| ·通过GFP基因表达对omlA基因启动子序列功能特性研究 | 第67页 |
| ·枯草芽苞杆菌sacB基因在胸膜肺炎放线杆菌中表达特性研究 | 第67-69页 |
| ·sacB基因的PCR扩增及中间转移质粒pSKOS的构建 | 第67-69页 |
| ·编码果聚糖蔗糖酶sacB基因的表达特性研究 | 第69页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌基因工程突变株HBC~-／GFP~+的构建 | 第69-78页 |
| ·含缺失apxⅡCA基因的转移质粒pSK-xⅡCA~-／GSA~+的构建 | 第69-74页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌血清7型apxⅡCA基因DNA扩增与克隆 | 第69-70页 |
| ·重组中间质粒pSK-XⅡCA~-／GFP~+的构建 | 第70-71页 |
| ·氨苄青霉素基因的PCR扩增及中间质粒pSKOSA的构建 | 第71-72页 |
| ·重组转移质粒pSK-xⅡCA~-／GSA~+的构建 | 第72-74页 |
| ·重组转移质粒pSK-xⅡCA~-／GSA~+电转化及基因工程突变株HBC~-／GFP~+筛选 | 第74页 |
| ·基因工程突变株HBC~-／GFP~+鉴定及生物学特性 | 第74-78页 |
| ·PCR鉴定 | 第74-75页 |
| ·Southern blot鉴定 | 第75-76页 |
| ·Western blot检测 | 第76页 |
| ·溶血性试验 | 第76-77页 |
| ·生长特性试验 | 第77页 |
| ·GFP基因的遗传稳定性试验 | 第77-78页 |
| ·基因工程突变株HBC~-／GFP~+对Bab／C小鼠的安全性和免疫效力试验 | 第78-81页 |
| ·基因工程突变株HBC~-／GFP~+对Bab／C小鼠的安全性试验 | 第78-79页 |
| ·基因工程突变株HBC~-／GFP~+Bab／C小鼠的免疫效力试验 | 第79-81页 |
| ·免疫Bab／c小鼠抗ApxⅡ的ELISA抗体检测 | 第79页 |
| ·免疫Bab／c小鼠抗全菌的间接血凝抗体水平检测 | 第79-81页 |
| ·小鼠攻毒后保护效力试验 | 第81页 |
| ·基因工程突变株HBC~-／GFP~+对仔猪的安全性和免疫效力试验 | 第81-89页 |
| ·仔猪的安全性试验 | 第81-82页 |
| ·仔猪的免疫效力试验 | 第82-89页 |
| ·试验分组、免疫途径和免疫剂量 | 第82-83页 |
| ·免疫仔猪ApxⅡ-ELISA抗体检测 | 第83-84页 |
| ·免疫仔猪间接血凝抗体检测 | 第84-85页 |
| ·免疫仔猪攻毒保护效果试验 | 第85-89页 |
| ·临床症状 | 第85页 |
| ·体温变化 | 第85-86页 |
| ·攻毒后的保护效果 | 第86-88页 |
| ·攻毒后的肺部病变情况 | 第88-89页 |
| 第5章 讨论 | 第89-98页 |
| ·负向选择方法的选择 | 第89-90页 |
| ·外膜脂蛋白基因启动子序列功能和sacB基因表达特性研究 | 第90-91页 |
| ·apxⅡCA基因的选择及克隆 | 第91-92页 |
| ·重组转移质粒pSK-xⅡCA~-/GSA~+的构建 | 第92-93页 |
| ·基因缺失疫苗株HBC~-/GFP~+的毒力 | 第93页 |
| ·基因缺失疫苗株HBC~-/GFP~+诱导动物的免疫效力 | 第93-95页 |
| ·基因缺失疫苗HBC~-/GFP~+诱导动物的免疫保护 | 第95-98页 |
| ·仔猪的安全性试验 | 第95页 |
| ·仔猪的安全性试验 | 第95-98页 |
| 第6章 结论 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-117页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第117-118页 |
| 附录 | 第118-120页 |
| 致谢 | 第120页 |
