| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-34页 |
| 第一章 马铃薯Y 病毒属病毒蚜传辅助蛋白(Helper Component Proteinase)研究进展 | 第12-22页 |
| 1. 病毒的基因组结构及HC-Pro 的发现 | 第12-14页 |
| 2. HC-Pro 的功能及研究进展 | 第14-22页 |
| ·HC-Pro 参与病毒复制及症状表达 | 第14-15页 |
| ·HC-Pro 参与病毒移动 | 第15-16页 |
| ·HC-Pro 参与病毒种传过程 | 第16-17页 |
| ·蛋白酶活性 | 第17页 |
| ·协生作用 | 第17-18页 |
| ·蚜传因子活性 | 第18-20页 |
| ·沉默抑制活性 | 第20-22页 |
| 第二章 RNA介导的病毒抗性 | 第22-32页 |
| 1. RNA 沉默及其介导的对病毒的抗病 | 第22-29页 |
| ·RNA 沉默现象 | 第22-23页 |
| ·RNA 沉默作用的机理 | 第23页 |
| ·dsRNA 是RNA 沉默的诱导因子 | 第23-25页 |
| ·RNA 沉默信号 | 第25-26页 |
| ·RNA 沉默效应复合物的建立 | 第26-28页 |
| ·RISC的功能 | 第28页 |
| ·转基因植物中RNA介导的病毒抗性 | 第28-29页 |
| 2. RNA沉默的抑制 | 第29-32页 |
| ·沉默抑制现象 | 第29页 |
| ·沉默抑制蛋白 | 第29-32页 |
| 第三章 研究的目的与意义 | 第32-34页 |
| 第二部分 实验研究 | 第34-91页 |
| 第一章 马铃薯Y 病毒HC-Pro 突变体构建及转基因研究 | 第34-68页 |
| 1. 材料 | 第34页 |
| ·病毒毒源 | 第34页 |
| ·供试植物 | 第34页 |
| ·菌种、质粒、主要试剂 | 第34页 |
| 2. 方法 | 第34-54页 |
| ·PVYNHC-Pro 短片段的获得 | 第34-36页 |
| ·质粒pUCHC DNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·质粒DNA 的酶切、DNA 片段的酶切及酶切的质粒与DNA 片段的连接 | 第37-38页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| ·重组质粒载体向大肠杆菌的转化 | 第39页 |
| ·重组质粒载体的提取与鉴定 | 第39-40页 |
| ·HC-Pro 基因N1短片段原核表达载体pETN1的构建及原核表达 | 第40-43页 |
| ·HC-Pro 基因N1 短片段真核表达载体pROKN1 的构建 | 第43-48页 |
| ·重组的质粒载体pROKN1 的真核表达 | 第48-54页 |
| 3. 结果与分析 | 第54-65页 |
| ·短片段N1 的PCR 扩增 | 第54-55页 |
| ·N1 片断的克隆及重组子鉴定 | 第55页 |
| ·基因序列的测定与分析 | 第55-57页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第57页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第57-58页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·烟草转基因植株再生 | 第59-62页 |
| ·转基因烟草的抗病性分析及ELISA 检测 | 第62-65页 |
| ·蚜虫传毒实验 | 第65页 |
| 4. 结论与讨论 | 第65-68页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-68页 |
| 第二章 本生烟叶组织培养及遗传转化体系的建立 | 第68-80页 |
| 1 前言 | 第68页 |
| 2. 材料与方法 | 第68-70页 |
| ·材料 | 第68页 |
| ·烟草 | 第68页 |
| ·培养基 | 第68页 |
| ·方法 | 第68-70页 |
| ·本生烟组培体系的建立 | 第68-69页 |
| ·N1、HC、C2 转化本生烟 | 第69页 |
| ·实时荧光PCR 检测355 启动子及NOS 终止子 | 第69-70页 |
| ·转基因植株的抗病性及ELISA 检测 | 第70页 |
| 3 结果与分析 | 第70-78页 |
| ·芽分化 | 第70-71页 |
| ·生根 | 第71页 |
| ·移栽 | 第71-72页 |
| ·利用355 启动子基因和NOS 终止子基因实时荧光PCR 检测转基因 | 第72-76页 |
| ·转基因烟草的抗病性分析及ELISA 检测 | 第76-78页 |
| 4 结论与讨论 | 第78-80页 |
| 第三章 来源于HC-Pro 基因中间区域的单链RNA 及双链RNA 的真核表达载体的构建 | 第80-91页 |
| 1 材料与方法 | 第80-85页 |
| ·材料 | 第80页 |
| ·方法 | 第80-85页 |
| ·PVYNHC-Pro 中间区域短片段DSM 的克隆 | 第80-82页 |
| ·正向单链片段植物表达载体pFGC1008/DSM 的构建 | 第82-83页 |
| ·基于正向单片断植物表达载体pFGC1008/DSM的双链RNA表达载体pFGC1008/dsDSM的构建 | 第83-85页 |
| ·鉴定的 pFGC1008、pFGC1008/dsDSM、pFGC1008/DSM 转化农杆菌 LBA4404 | 第85页 |
| 2 结果与分析 | 第85-89页 |
| ·短片段DSM 的PCR 扩增 | 第85页 |
| ·DSM 片断的克隆及重组子鉴定 | 第85-86页 |
| ·基因序列的测定与分析 | 第86-87页 |
| ·正向单片段植物表达载体pFGC1008/DSM 的构建 | 第87-88页 |
| ·基于正向单片断植物表达载体pFGC1008/DSM 的 双 链 RNA 表 达 载pFGC1008/dsDSM的构建 | 第88页 |
| ·pFGC1008、pFGC1008/DSM、pFGC1008/dsDSM 转化农杆菌LBA4404 | 第88-89页 |
| 3 结论与讨论 | 第89-91页 |
| ·小结 | 第89页 |
| ·讨论 | 第89-91页 |
| 结论 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
