| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一部分 文献综述 | 第17-57页 |
| 第一章 传染性法氏囊病病毒的分子生物学研究进展 | 第18-36页 |
| 1、IBDV的基因组结构及编码的蛋白 | 第18-24页 |
| 1．1 5’-NCR和3’-NCR | 第20-21页 |
| 1．2 病毒的蛋白 | 第21-24页 |
| 2、IBDV的形态和结构 | 第24页 |
| 3、病毒抗原漂移与毒力变异的分子机制 | 第24-26页 |
| 4、IBDV的复制和繁殖 | 第26-27页 |
| 5、IBDV新型疫苗研究进展 | 第27-30页 |
| 5．1 重组亚单位疫苗 | 第27-28页 |
| 5．2 重组活载体疫苗 | 第28-29页 |
| 5．3 基因缺失疫苗 | 第29页 |
| 5．4 病毒样颗粒(VLPs) | 第29页 |
| 5．5 高压力失活疫苗 | 第29-30页 |
| 5．6、DNA疫苗的研究 | 第30页 |
| 6、目前存在的问题及对策 | 第30-36页 |
| 第二章 DNA疫苗免疫效应增强策略研究进展 | 第36-57页 |
| 1、DNA疫苗的组成及作用机理 | 第36-39页 |
| 1．1 DNA疫苗的组成和功能 | 第36-37页 |
| 1．2 DNA疫苗的作用机制 | 第37-39页 |
| 2、DNA疫苗免疫效应的增强策略 | 第39-52页 |
| 2．1 目的基因的筛选 | 第39页 |
| 2．2 载体的合理设计 | 第39-40页 |
| 2．3 抗原表达量的提高 | 第40-41页 |
| 2．4 抗原免疫原性的增强 | 第41-42页 |
| 2．5 合适投递系统的选择 | 第42-44页 |
| 2．6 基因免疫佐剂的运用 | 第44-47页 |
| 2．7 优化免疫方案 | 第47-49页 |
| 2．8 融合基因DNA疫苗 | 第49-52页 |
| 3、展望 | 第52-57页 |
| 第二部分 研究内容 | 第57-98页 |
| 第一章 IBDVVP2／4／3-ChIL-2融合基因真核表达载体构建 | 第58-75页 |
| 1 材料 | 第59-60页 |
| 1．1 载体、宿主菌 | 第59页 |
| 1．2 试验试剂 | 第59-60页 |
| 2 方法 | 第60-67页 |
| 2．1 融合基因的PCR扩增 | 第60-63页 |
| 2．2 重组质粒pCI-VP2／4／3-IL-2、pCI-IL-2-VP2／4／3的构建 | 第63-66页 |
| 2．3 重组质粒pCI-VP2／4／3-IL-2、pCI-IL-2-VP2／4／3的鉴定 | 第66-67页 |
| 3 结果 | 第67-71页 |
| 3．1 引物设计和PCR扩增目的基因 | 第67-68页 |
| 3．2 融合基因真核表达质粒的构建 | 第68-69页 |
| 3．3 重组质粒的鉴定 | 第69-71页 |
| 4 讨论 | 第71-75页 |
| 第二章 IBDVVP2／4／3-ChIL-2融合基因真核表达质粒在Vero细胞中的表达 | 第75-87页 |
| 1 材料 | 第76-77页 |
| 1．1 载体、质粒、宿主菌 | 第76页 |
| 1．2 试验试剂 | 第76-77页 |
| 2 方法 | 第77-81页 |
| 2．1 融合基因重组质粒的鉴定与扩增 | 第77页 |
| 2．2 转染级超纯度真核表达质粒的制备 | 第77页 |
| 2．3 脂质体介导pCI-VP2／VP4／VP3转染Vero细胞 | 第77-78页 |
| 2．4 间接免疫荧光抗体法检测蛋白的表达 | 第78页 |
| 2．5 RT-PCR检测融合基因的表达 | 第78-79页 |
| 2．6 SDS-PAGE | 第79-80页 |
| 2．7 Western blotting | 第80-81页 |
| 3 结果 | 第81-84页 |
| 3．1 重组质粒转染后细胞形态学变化 | 第81-82页 |
| 3．2 RT-PCR检测融合基因转录 | 第82页 |
| 3．3 重组质粒在Vero细胞中的瞬时表达 | 第82-83页 |
| 3．4 SDS-PAGE及Western-blot检测抗原的免疫反应性 | 第83-84页 |
| 4 讨论 | 第84-87页 |
| 第三章 IBDVVP2／4／3-ChIL-2融合基因DNA疫苗免疫原性研究 | 第87-98页 |
| 1 材料 | 第88-89页 |
| 1．1 病毒株、质粒 | 第88页 |
| 1．2 试验试剂 | 第88-89页 |
| 2 方法 | 第89-92页 |
| 2．1 真核表达质粒的大量制备 | 第89页 |
| 2．2 质粒DNA的纯化、鉴定和定量 | 第89-90页 |
| 2．3 试验动物分组及免疫 | 第90页 |
| 2．4 IBDV母源抗体的检测 | 第90页 |
| 2．5 抗IBDV血清ELISA抗体水平的测定 | 第90页 |
| 2．6 中和抗体的测定 | 第90-91页 |
| 2．7 淋巴细胞增殖反应的测定 | 第91-92页 |
| 2．8 动物攻毒保护试验 | 第92页 |
| 2．9 法氏囊病理学观察及统计学分析 | 第92页 |
| 3 结果 | 第92-96页 |
| 3．1 血清抗IBDV抗体水平的测定 | 第92-93页 |
| 3．2 病毒中和试验 | 第93-94页 |
| 3．3 DNA疫苗各试验组诱导的外周血淋巴细胞增殖效果观察 | 第94页 |
| 3．4 DNA疫苗各试验组对强毒的攻击保护效果观察 | 第94页 |
| 3．5 法氏囊病理组织学检查 | 第94-96页 |
| 4 讨论 | 第96-98页 |
| 第三部分 附录 | 第98-106页 |
| 附录一：英文缩写及中英文对照 | 第99-100页 |
| 附录二：质粒图谱 | 第100-101页 |
| 附录三：常用试剂及配制 | 第101-105页 |
| 附录四：攻读硕士期间发表或录用的学术论文 | 第105-106页 |
| 附录五：致谢 | 第106页 |
