| 中文摘要 | 第1-4页 |
| 英文摘要 | 第4-5页 |
| 缩略词 | 第5-10页 |
| 1 绪论 | 第10-16页 |
| ·植物液泡膜Na~+/H+逆向转运蛋白的研究进展 | 第10-15页 |
| ·Na~+在液泡膜中区域化效应 | 第10页 |
| ·植物液泡膜Na~+／H~+逆向转运蛋白基因的分离 | 第10-12页 |
| ·植物液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因的功能与作用机制 | 第12-13页 |
| ·植物液泡膜Na~+／H~+逆向转运蛋白基因的表达特点 | 第13-14页 |
| ·调控植物液泡膜Na~+／H~+逆向转运蛋白基因表达的信号路径 | 第14页 |
| ·液泡膜Na~+／H~+逆向转运蛋白基因在植物耐盐基因工程中应用 | 第14-15页 |
| ·本研究的目的、内容和意义 | 第15-16页 |
| 2 紫花苜蓿液泡膜Na~+／H~+逆向转运蛋白基因部分cDNA的克隆 | 第16-27页 |
| ·材料 | 第16-17页 |
| ·植物材料和E.coli菌株 | 第16页 |
| ·生化试剂 | 第16-17页 |
| ·方法 | 第17-22页 |
| ·材料的获取 | 第17页 |
| ·总RNA提取(硫氢酸胍法) | 第17-18页 |
| ·引物的设计与合成 | 第18页 |
| ·mRNA的反转录 | 第18页 |
| ·PCR扩增 | 第18-19页 |
| ·PCR产物的回收和纯化 | 第19页 |
| ·连接反应 | 第19-20页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第20页 |
| ·连接产物的转化 | 第20页 |
| ·菌体PCR | 第20-21页 |
| ·酶切鉴定 | 第21页 |
| ·序列分析 | 第21-22页 |
| ·结果与分析 | 第22-25页 |
| ·简并引物的设计 | 第22页 |
| ·紫花苜蓿总RNA的提取 | 第22-23页 |
| ·PCR扩增结果 | 第23页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第23-24页 |
| ·测序结果及序列分析 | 第24-25页 |
| ·讨论 | 第25-26页 |
| ·小结 | 第26-27页 |
| 3 紫花苜蓿液泡膜Na~+／H~+逆向转运蛋白基因cDNA全序列的克隆及序列分析 | 第27-43页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·植物材料和E.coli菌株 | 第27页 |
| ·试剂盒 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-31页 |
| ·3′-RACE获得MsNHX1基因的3′端序列 | 第27-29页 |
| ·5′-RACE获得MsNHX1基因的5′端序列 | 第29-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-41页 |
| ·MsNHX1基因3′端序列的克隆 | 第31-32页 |
| ·MsNHX1基因5′端序列的克隆 | 第32-34页 |
| ·MsNHX1基因的cDNA全序列的获得及其结构分析 | 第34-36页 |
| ·紫花苜蓿液泡膜Na~+／H~+逆向转运蛋白序列分析 | 第36-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 4 MsNHX1基因的表达分析 | 第43-47页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·方法 | 第43页 |
| ·引物设计 | 第43页 |
| ·材料的获取 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-45页 |
| ·半定量RT-PCR条件的优化 | 第43-44页 |
| ·盐胁迫下MsNHX1基因在不同组织中的表达分析 | 第44页 |
| ·盐胁迫时间对MsNHX1基因表达的影响 | 第44-45页 |
| ·不同非生物胁迫对MsNHX1基因表达的影响 | 第45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46-47页 |
| 5 MsNHX1基因的转化 | 第47-54页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·植物材料和菌株 | 第47页 |
| ·载体 | 第47页 |
| ·培养基的配置 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-49页 |
| ·引物设计 | 第47页 |
| ·表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第48页 |
| ·农杆菌转化及鉴定 | 第48-49页 |
| ·紫花苜蓿的转化 | 第49页 |
| ·紫花苜蓿基因组DNA的少量提取(CTAB法) | 第49页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第49页 |
| ·结果与分析 | 第49-52页 |
| ·表达载体的构建 | 第49-51页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第51页 |
| ·再生植株的获得 | 第51-52页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 6 结论与展望 | 第54-55页 |
| ·主要结论 | 第54页 |
| ·创新点 | 第54页 |
| ·后续研究工作的展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 附录 | 第60-61页 |
