| 主要英文缩略词表 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Ⅰ 前 言 | 第11-12页 |
| Ⅱ 文献综述 | 第12-30页 |
| ·国内外甜瓜育种研究进展 | 第12-18页 |
| ·育种目标 | 第12-13页 |
| ·种质资源的研究 | 第13页 |
| ·抗病育种 | 第13-14页 |
| ·倍性育种研究 | 第14-15页 |
| ·杂交一代优势利用 | 第15页 |
| ·生物技术在甜瓜育种中的应用 | 第15-16页 |
| ·基因工程技术在甜瓜育种中的应用 | 第16-18页 |
| ·外源DNA导入植物细胞的方法 | 第16-17页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第17-18页 |
| ·转基因技术在甜瓜上的应用 | 第18页 |
| ·转基因技术的运用前景及问题 | 第18页 |
| ·植物抗真菌病害基因工程的策略 | 第18-24页 |
| ·在植物与病原识别水平上调控而激活植物的抗病机制 | 第19-20页 |
| ·植物抗真菌基因 | 第19页 |
| ·病原相关蛋白质 | 第19-20页 |
| ·导入降解或抑制病原菌致病因子的基因使植物抗病 | 第20-21页 |
| ·植物抗毒素基因 | 第20页 |
| ·多聚半乳糖醛酸抑制蛋白(PGIP) | 第20页 |
| ·核糖体失活蛋白(RIP) | 第20-21页 |
| ·几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因及其应用 | 第21-24页 |
| ·几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因的特性和分类 | 第21-22页 |
| ·几丁质酶的抗性机理 | 第22-23页 |
| ·几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因在植物基因工程中的应用 | 第23-24页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第24-26页 |
| ·转化机理 | 第24页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化方法 | 第24-26页 |
| ·农杆菌介导的基因转移方法不足之处 | 第26页 |
| ·外源基因在植物中的表达策略 | 第26-28页 |
| ·启动子的选择及优化 | 第27页 |
| ·增强翻译效率 | 第27-28页 |
| ·本研究的目的意义 | 第28-30页 |
| Ⅲ 本研究的技术路线 | 第30页 |
| Ⅳ 实验部分 | 第30-67页 |
| ·维管束特异性启动子BSP的克隆 | 第30-42页 |
| ·实验材料 | 第30-32页 |
| ·植物材料 | 第30页 |
| ·菌株及质粒 | 第30页 |
| ·酶与试剂 | 第30-31页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·缓冲液 | 第31-32页 |
| ·杨树基因组DNA提取缓冲液 | 第31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第31页 |
| ·TE 缓冲液 | 第31-32页 |
| ·仪器设备 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-38页 |
| ·杨树总基因组DNA的提取和检测 | 第32页 |
| ·杨树基因组总DNA的提取方法 | 第32页 |
| ·DNA 完整性检测 | 第32页 |
| ·PCR 反应体系 | 第32-33页 |
| ·PCR 反应程序 | 第33页 |
| ·目的片断的回收 | 第33页 |
| ·目的片断与pGEm-T easy vector 载体的连接 | 第33页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第34页 |
| ·小量碱法提取质粒 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定体系 | 第35页 |
| ·基因枪法对烟草叶片的转化 | 第35-36页 |
| ·钨粉的制备 | 第35-36页 |
| ·微弹DNA的制备 | 第36页 |
| ·基因枪的装备 | 第36页 |
| ·基因枪的轰击 | 第36页 |
| ·过渡培养直至生根 | 第36页 |
| ·根癌农杆菌的制备及转化 | 第36-38页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的转化 | 第37页 |
| ·农杆菌Ti 质粒DNA碱法小量提取 | 第37-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-42页 |
| ·杨树基因组总DNA的获得及完整性 | 第38页 |
| ·杨树维管束特异启动子(BSP)的克隆 | 第38-39页 |
| ·BSP启动子片段的序列分析 | 第39-41页 |
| ·BSP的活性及特点分析 | 第41-42页 |
| ·BSP启动子驱动的GFP基因植物表达载体构建 | 第41-42页 |
| ·BSP 启动子活性分析 | 第42页 |
| ·几丁质酶基因(Chi)和β-1,3-葡聚糖酶基因(Glu)的克隆 | 第42-63页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·菌株和质粒 | 第42页 |
| ·酶与试剂 | 第42页 |
| ·真菌培养基 | 第42页 |
| ·引物的设计 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-49页 |
| ·PCR 反应体系 | 第43页 |
| ·PCR 反应的循环参数 | 第43页 |
| ·PCR 扩增片段的回收 | 第43页 |
| ·目的片段与载体的连接方法 | 第43-44页 |
| ·载体的构建 | 第44-46页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第44页 |
| ·Chi 基因的原核表达载体构建 | 第44页 |
| ·Glu基因的原核表达载体构建 | 第44页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第44-46页 |
| ·具有CaMV35S-Chi-终止子表达单元的植物表达载体构建 | 第44-45页 |
| ·具有CaMV35S-Glu-终止子表达单元的植物表达载体构建 | 第45页 |
| ·具有Chi和Glu基因的表达单元的植物双价表达载体构建 | 第45-46页 |
| ·Chi和Glu基因在原核表达系统中的表达蛋白鉴定 | 第46-49页 |
| ·表达产物的制备 | 第46-47页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第47-48页 |
| ·目标蛋白的回收 | 第48-49页 |
| ·抑菌实验方法 | 第49页 |
| ·实验结果 | 第49-63页 |
| ·几丁质酶基因(Chi)的克隆鉴定和序列分析 | 第49-52页 |
| ·β-1,3-葡聚糖酶基因(Glu)的克隆鉴定及序列分析 | 第52-55页 |
| ·载体的构建及其检测 | 第55-61页 |
| ·Chi基因的原核表达载体构建及检测 | 第55-56页 |
| ·Glu基因的原核表达载体构建及检测 | 第56-57页 |
| ·BSP启动子驱动的Chi基因植物表达载体构建及检测 | 第57-58页 |
| ·BSP启动子驱动的Glu基因植物表达载体构建及检测 | 第58-60页 |
| ·植物Chi和Glu双价表达载体pBIBCG 的构建 | 第60-61页 |
| ·Chi与Glu基因在原核表达系统中表达 | 第61-62页 |
| ·Chi和Glu对病原菌的抑制效果 | 第62-63页 |
| ·讨 论 | 第63-67页 |
| ·BSP 启动子的活性及特点 | 第63-64页 |
| ·Chi和Glu 基因在原核中的高效表达的措施 | 第64-65页 |
| ·关于双价基因表达载体的构建 | 第65页 |
| ·关于转化农杆菌及其鉴定 | 第65-66页 |
| ·Chi 和 Glu 表达产物的抑菌效果 | 第66-67页 |
| Ⅴ 农杆菌介导的Chi和Glu双价基因对甜瓜的遗传转化研究 | 第67-70页 |
| ·转化操作步骤 | 第67-68页 |
| ·实验材料 | 第67页 |
| ·供试的甜瓜品种 | 第67页 |
| ·根癌农杆菌工程菌 | 第67页 |
| ·甜瓜再生培养基 | 第67页 |
| ·甜瓜无菌苗的培养 | 第67-68页 |
| ·种子消毒 | 第67页 |
| ·无菌苗的培养 | 第67页 |
| ·受体材料预培养 | 第67页 |
| ·根癌农杆菌的培养及活化 | 第67-68页 |
| ·浸染 | 第68页 |
| ·共培养 | 第68页 |
| ·选择培养 | 第68页 |
| ·继代选择培养 | 第68页 |
| ·生根培养 | 第68页 |
| ·实验结果 | 第68-69页 |
| ·甜瓜茎和叶子的愈伤组织 | 第68页 |
| ·甜瓜再生苗的生根 | 第68页 |
| ·继代扩增繁殖 | 第68-69页 |
| ·讨 论 | 第69-70页 |
| ·关于甜瓜基因转化受体系统的建立 | 第69页 |
| ·芽分化的诱导 | 第69页 |
| ·转化基因型依赖性的问题 | 第69页 |
| ·转基因甜瓜的抗性 | 第69-70页 |
| Ⅵ 结 论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 图版5.2说明 | 第77-78页 |
| 附图5.2 | 第78-80页 |
| Abstract | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
