| 摘要 | 第1-7页 |
| 引言与文献综述 | 第7-34页 |
| 1 香菇研究进展 | 第7-12页 |
| ·香菇的生物学特性 | 第7-8页 |
| ·香菇的经济价值 | 第8-11页 |
| ·香菇的食用价值 | 第8页 |
| ·香菇的医疗价值 | 第8-11页 |
| ·我国香菇育种的回顾与展望 | 第11-12页 |
| 2 启动子研究进展 | 第12-24页 |
| ·启动子 | 第12-13页 |
| ·启动子克隆方法 | 第13-15页 |
| ·利用启动子探针质粒载体筛选启动子 | 第13-14页 |
| ·PCR扩增方法 | 第14-15页 |
| ·食用菌中启动子的分离 | 第15-18页 |
| ·ras启动子 | 第16-17页 |
| ·gpd启动子 | 第17-18页 |
| ·其它启动子 | 第18页 |
| ·食用菌原生质体法遗传转化研究进展 | 第18-22页 |
| ·PEG法 | 第19-20页 |
| ·电激法 | 第20-21页 |
| ·原生质体转化载体及转化条件 | 第21-22页 |
| ·转化载体 | 第21-22页 |
| ·转化条件 | 第22页 |
| ·筛选标记 | 第22-24页 |
| ·营养缺陷型标记 | 第22-23页 |
| ·抗生素抗性筛选标记 | 第23页 |
| ·除草剂和杀菌剂抗性筛选标记 | 第23页 |
| ·代谢产物抗性筛选标记 | 第23-24页 |
| ·提供给受体新功能的标记 | 第24页 |
| ·香菇转化研究中的筛选标记-潮霉素抗性标记 | 第24页 |
| 3 细胞色素P450的研究进展 | 第24-32页 |
| ·植物P450的发现及组分 | 第26-28页 |
| ·真菌细胞色素P450 | 第28页 |
| ·昆虫细胞色素P450 | 第28-30页 |
| ·p450s与肿瘤 | 第30-32页 |
| ·p450Ⅰal | 第30页 |
| ·p450Ⅱdl | 第30-31页 |
| ·p450Ⅱel | 第31-32页 |
| ·其他 | 第32页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第32-33页 |
| 5 技术路线 | 第33-34页 |
| 第一部分 香菇ras、gpd启动子的克隆 | 第34-74页 |
| 1 材料与方法 | 第34-46页 |
| ·启动子的克隆材料 | 第34页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·菌种 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·启动子功能鉴定的实验材料与试剂 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35-40页 |
| ·香菇基因组DNA的提取 | 第35-36页 |
| ·香菇菌丝的培养与收集 | 第35页 |
| ·香菇基因组DNA的提取 | 第35-36页 |
| ·引物设计 | 第36页 |
| ·启动子的PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·PCR产物的回收 | 第37页 |
| ·目的片段的连接与转化 | 第37-39页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第39-40页 |
| ·表达载体的构建 | 第40-44页 |
| ·接头的设计与合成: | 第40页 |
| ·接头的退火 | 第40页 |
| ·质粒pCAMBIA130T的双酶切反应 | 第40-41页 |
| ·质粒Lgpd1、Lgpd2、RAS的双酶切反应 | 第41-42页 |
| ·目的片段的连接与环化 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第43页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第43-44页 |
| ·启动子功能验证 | 第44-46页 |
| ·草菇材料的准备与抗性梯度预实验 | 第44页 |
| ·材料的准备 | 第44页 |
| ·抗性梯度试验 | 第44页 |
| ·原生质体转化鉴定启动子活性 | 第44-46页 |
| ·草菇原生质体的制备 | 第44-45页 |
| ·草菇电击转化 | 第45页 |
| ·转化子的筛选 | 第45-46页 |
| ·GUS组织化学分析 | 第46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-74页 |
| ·香菇基因组DNA的提取 | 第46-47页 |
| ·香菇启动子的PCR扩增 | 第47页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第47-48页 |
| ·启动子序列及其分析 | 第48-68页 |
| ·ras启动子序列及其分析 | 第48-55页 |
| ·启动子片段 BLASTn分析结果及核心启动区域的分析 | 第48-51页 |
| ·promoter2.0 prediction | 第51页 |
| ·Molecular Analysis Section | 第51-52页 |
| ·NN-score分析结果 | 第52-53页 |
| ·plant cis-acting regulatory DNA elements | 第53-55页 |
| ·gpd启动子序列及其分析 | 第55-68页 |
| ·启动子片段BLASTn分析结果及核心启动区域的分析 | 第55-62页 |
| ·Molecular Analysis Section | 第62-64页 |
| ·NN-score分析结果 | 第64-65页 |
| ·plant cis-acting regulatory DNA elements | 第65-68页 |
| ·启动子的功能鉴定 | 第68-69页 |
| ·表达载体的构建 | 第68-69页 |
| ·香菇抗性筛选结果 | 第69-71页 |
| ·草菇材料的准备与抗性梯度预试验 | 第71-72页 |
| ·转化结果 | 第72-74页 |
| 第二部分 香菇细胞色素P450基因的克隆 | 第74-80页 |
| 1 材料与方法 | 第74-80页 |
| ·材料 | 第74-77页 |
| ·实验材料 | 第74页 |
| ·菌种 | 第74页 |
| ·试剂 | 第74页 |
| ·方法 | 第74-77页 |
| ·香菇基因组DNA的提取 | 第74页 |
| ·香菇细胞色素P450基因特异片段的克隆 | 第74-77页 |
| ·引物设计 | 第74-75页 |
| ·PCR扩增 | 第75页 |
| ·PCR产物的回收 | 第75页 |
| ·目的片段的连接与转化 | 第75-76页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第76-77页 |
| ·目的片段的序列测定及序列分析 | 第77页 |
| 2 结果与分析 | 第77-80页 |
| ·香菇基因组DNA | 第77页 |
| ·香菇细胞色素P450基因片段的PCR扩增 | 第77-78页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第78页 |
| ·PCR产物序列的测序结果及分析 | 第78-80页 |
| 讨论 | 第80-83页 |
| 结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-92页 |
| Abstract | 第92-94页 |
| 附录 | 第94-104页 |
| 致谢 | 第104页 |
