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利用Tn5401转座子构建解离载体并在苏云金芽胞杆菌中高效、稳定表达AiiA蛋白

摘要第1-7页
Abstract第7-8页
1 前言第8-30页
   ·数量敏感信号分子第8-9页
   ·细菌感知群体数量的敏感信号系统第9-12页
     ·革兰氏阴性细菌中感知种内群体数量的敏感信号系统第9-10页
     ·革兰氏阳性细菌中感知种内群体数量的敏感信号系统第10-11页
     ·种间群体数量敏感信号系统第11-12页
   ·AHLS分子降解酶AiiA蛋白的发现第12-13页
   ·展望第13-14页
   ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的启动子第14页
   ·S-层蛋白简介第14-21页
     ·S-层的结构第15-16页
     ·S-层的化学组成第16-18页
     ·S-层蛋白的合成第18-19页
     ·S-层的功能第19-20页
     ·S-层的应用潜力第20-21页
     ·苏云金芽胞杆菌CTC菌株的S层蛋白第21页
   ·S-层蛋白细胞表面展示第21-26页
     ·S-层蛋白细胞表面展示的机制第21-24页
     ·S-层蛋白表面展示的应用第24-26页
   ·高效表达AiiA蛋白的策略第26页
   ·转座子在基因工程菌构建中的应用第26-30页
     ·苏云金芽胞杆菌转座子第26-28页
       ·Tn4430第26-27页
       ·Tn5401第27-28页
       ·苏云金芽胞杆菌转座子的转座方式第28页
     ·苏云金芽胞杆菌转座子的应用思路第28-30页
2 研究目的和意义第30-31页
3 材料和方法第31-35页
   ·材料第31-32页
     ·质粒第31页
     ·菌种第31页
     ·菌种的培养第31-32页
   ·方法第32-35页
     ·大肠杆菌质粒的提取第32页
     ·苏云金杆菌质粒的提取第32-33页
     ·D 苏云金杆菌总DNA的提取第33页
     ·琼脂糖凝胶电泳分离的DNA的回收第33页
     ·PCR扩增第33页
     ·大肠杆菌的常规转化第33页
     ·苏云金杆菌的电转化第33-34页
     ·蛋白的SDS-PAGE第34页
     ·AiiA活性的检测第34页
     · SDS-PAGE凝胶的制备第34页
     · 营养期样品制备第34页
     · 电泳、染色及脱色第34页
     · 电泳、染色及脱色第34-35页
     · A?A活性的检测第35页
4 结果与分析第35-47页
   ·解离载体pBMB5401及含融合基因中间载体的构建第35-40页
   ·slh-aiiA及pro3A-aiiA两个融合基因作三种组合得到三个质粒第40-43页
   ·质粒pBMBcaiiA,pBMB3aiiA及pBMB3439在BMB171中的解离及解离前后质粒的稳定性第43-44页
   ·重组菌BMB3439R,BMBcaiiAR和BMB3aiiAR融合蛋白的表达第44页
   ·重组菌BMB3439R,BMBcaiiAR和BMB3aiiAR分解AHLs分子的活性检测第44-45页
   ·重组菌BMB3439R,BMBcaiiAR和BMB3aiiAR对胡萝卜软腐欧文氏菌致病性的抑制效果第45-47页
5 讨论第47-49页
参考文献第49-57页
致谢第57页

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