| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 前言 | 第6-14页 |
| 第1章 APXa 二元植物表达载体构建 | 第14-39页 |
| ·材料 | 第14-17页 |
| ·植物材料 | 第14页 |
| ·试剂与仪器 | 第14页 |
| ·PCR扩增引物设计与合成 | 第14-15页 |
| ·常用试剂的配制 | 第15-17页 |
| ·试验方法 | 第17-28页 |
| ·水稻叶片的获取 | 第17页 |
| ·水稻反转录cDNA的获得 | 第17-18页 |
| ·抗坏血酸过氧化酶(APXa)目的片段基因的获得 | 第18-19页 |
| ·目的基因片段APXa的T载体克隆 | 第19-22页 |
| ·植物二元表达载体PBI121-APXa构建 | 第22-24页 |
| ·构建的植物二元表达载体PEI121-APXa的PCR、酶切检测鉴定 | 第24-26页 |
| ·重组质粒PBI121-APXa导入根癌农杆菌EHA105 | 第26-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-34页 |
| ·提取水稻总RNA结果 | 第28页 |
| ·目的基因APXa的扩增结果 | 第28页 |
| ·T载体连接转化检测结果 | 第28-29页 |
| ·过渡pTriplEx_2载体的连接转化结果 | 第29-32页 |
| ·植物二元表达载体PBI121-APXa的构建 | 第32-33页 |
| ·质粒PBI121-APXa向农杆菌EHA105的导入及工程菌株的鉴定 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-37页 |
| ·RT-PCR技术 | 第34-35页 |
| ·PCR产物克隆方法 | 第35-36页 |
| ·载体与目的片段的连接转化 | 第36页 |
| ·中间载体导入农杆菌 | 第36-37页 |
| ·关于转化农杆菌的鉴定方法 | 第37页 |
| ·小结 | 第37-39页 |
| 第2章 转APXa基因烟草TK_(326) | 第39-52页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·植物材料 | 第39页 |
| ·工程菌株与表达载体 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39-40页 |
| ·方法 | 第40-43页 |
| ·烟草K_(326)无菌苗的培育 | 第40页 |
| ·农杆菌介导法烟草TK_(326)转化子的获得 | 第40-41页 |
| ·转基因烟草TK_(326)的PCR和PCR-Southern杂交鉴定检测 | 第41-43页 |
| ·转APXa基因烟草TaK_(326)的结果与分析 | 第43-48页 |
| ·农杆菌介导法烟草K_(326)转化子的获得 | 第43-45页 |
| ·转基因烟草的分子鉴定 | 第45-48页 |
| ·讨论 | 第48-51页 |
| ·影响转化效率的因素 | 第48-49页 |
| ·Kana、Carb和Cefo对烟草转化的景响 | 第49-50页 |
| ·转APXa烟草的PCR和Souther杂交检测 | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 1 成功构建的二元植物表达载体PBI121-APXa | 第52页 |
| 2 转抗坏血酸过氧化酶(APXa)基因烟草TK_(326) | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 附表 | 第58-63页 |
| 致谢词 | 第63页 |
