首页--工业技术论文--化学工业论文--基本有机化学工业论文--脂肪族化合物(无环化合物)的生产论文--脂肪族醇(醇、羟基化合物)及其衍生物论文--脂肪族醇论文

肺炎克氏杆菌甘油脱水酶基因克隆、序列分析及表达载体构建研究

中文摘要第1-13页
前言第13-15页
第一章 文献综述第15-42页
 第一节 1,3-丙二醇生产现状及应用前景第15-23页
  一、1,3-丙二醇概况第15页
  二、1,3-丙二醇的应用第15-16页
  三、1,3-丙二醇的生产历史和现状第16-17页
  四、1,3-丙二醇生物合成法的研究进展第17-22页
  五、1,3-丙二醇生物合成法存在问题及对策第22页
  六、基因改造的应用前景与未来与展望第22-23页
 第二节 1,3-丙二醇生物合成途径和1,3-丙二醇合成酶第23-29页
  一、1,3-丙二醇生物合成途径第23-24页
  二、1,3-丙二醇合成酶第24-29页
 第三节 1,3-丙二醇生物合成途径中限速酶—甘油脱水酶的研究进展第29-38页
  一、甘油脱水酶的概况第29页
  二、甘油脱水酶的结构与性质第29-32页
  三、甘油脱水酶基因的分子结构第32-33页
  四、甘油脱水酶基因工程的国内外研究进展第33-35页
  五、本研究的目的和意义第35-37页
  六、实验整体技术路线第37-38页
 参考文献第38-42页
第二章 肺炎克氏杆菌发酵生产1,3-丙二醇的研究第42-55页
 摘要第42页
 前言第42-43页
 一、材料和方法第43-44页
  1、培养方法第43-44页
  2、厌氧培养基的制备第44页
  3、测定方法第44页
  4、生长曲线测定第44页
  5、细菌形态的观察方法第44页
 二、结果与分析第44-50页
 三、讨论第50-52页
  (一) 关于发酵培养基对1,3-丙二醇产量的影响第50-51页
  (二) 关于发酵培养方式对1,3-丙二醇产量的影响第51-52页
  (三) 关于甘油两种代谢途径对1,3-丙二醇的产量的影响第52页
 本章小结第52-53页
 参考文献第53-55页
第三章 肺炎克氏杆菌甘油脱水酶基因的克隆及序列分析第55-99页
 摘要第55页
 前言第55-56页
 第一节 基因组DNA 的提取及目的酶基因引物的筛选第56-62页
  一、材料和方法第56-61页
   1、肺炎克氏杆菌基因组DNA 的提取与纯化第58-59页
   2、 1% 琼脂糖凝胶电泳分析第59-60页
   3、目的酶基因引物的设计第60页
   4、从不同基因组DNA 中进行PCR 扩增第60-61页
  二、结果与分析第61-62页
 第二节 甘油脱水酶α亚基基因的克隆、鉴定与序列分析第62-79页
  一、材料与方法第62-69页
   1、PCR 方法扩增gldA 基因第64页
   2、目的扩增片段的回收第64-65页
   3、PCR 产物与pMD18-T 载体直接连接第65页
   4、感受态细胞的制备第65-66页
   5、重组质粒的转化第66页
   6、菌落PCR 筛选阳性克隆第66-67页
   7、植菌第67页
   8、质粒的小量提取与纯化第67-68页
   9、重组质粒pMD18-T-gldA 的酶切鉴定和PCR 鉴定第68-69页
   10、重组质粒pMD18-T-gldA 的测序鉴定第69页
  二、结果与分析第69-79页
 第三节 甘油脱水酶β亚基基因的克隆与序列分析第79-86页
  一、材料与方法第79-81页
  二、结果与分析第81-86页
 第四节 甘油脱水酶γ亚基基因的克隆与序列分析第86-93页
  一、材料与方法第86-87页
  二、结果与分析第87-93页
 第五节 讨论第93-96页
  一、关于肺炎克氏杆菌菌株基因组DNA 的提取第93页
  二、关于引物设计第93-95页
  三、关于PCR 反应第95-96页
 本章小结第96-97页
 参考文献第97-99页
第四章 肺炎克氏杆菌甘油脱水酶单亚基基因表达载体的构建第99-127页
 摘要第99页
 前言第99-100页
 第一节 甘油脱水酶α亚基基因的表达载体的构建第100-109页
  一、材料与方法第100-105页
   1、PCR 方法从质粒pMD18-T-gldA 中扩增gldA 基因第101-102页
   2、PCR 扩增产物回收第102页
   3、PCR 回收产物的酶切处理第102页
   4、空的表达载体pMAL-c2X 的Xmn I 酶切处理第102-103页
   5、经 Xmn I 酶切后的表达载体pMAL-c2X 的 Xba I 酶切处理第103页
   6、PCR 产物和pMAL-c2X 载体连接第103页
   7、重组质粒的电转化第103-104页
   8、菌落PCR 筛选阳性克隆第104页
   9、质粒的提取与纯化第104页
   10、重组质粒pMAL-gldA 的酶切鉴定和PCR 鉴定第104-105页
   11、重组质粒pMAL-gldA 的测序鉴定第105页
  二、结果与分析第105-109页
 第二节 甘油脱水酶β亚基基因的表达载体的构建第109-116页
  一、材料与方法第109-113页
  二、结果与分析第113-116页
 第三节 甘油脱水酶γ亚基基因的表达载体的构建第116-123页
  一、材料与方法第116-120页
  二、结果与分析第120-123页
 第四节 讨论第123-125页
  一、关于基因克隆方式的选择第123页
  二、关于定向克隆时酶切位点的选择第123-124页
  三、关于载体构建第124-125页
 本章小结第125页
 参考文献第125-127页
第五章 肺炎克氏杆菌甘油脱水酶三亚基基因表达载体的构建第127-153页
 摘要第127页
 前言第127-128页
 第一节 甘油脱水酶基因在表达载体pMAL-c2X 上的构建第128-139页
  一、材料与方法第128-134页
   1、融合基因gldBC 的合成和克隆载体pSIM-gldBC 的构建第129-132页
   2、融合表达载体pMAL-gldABC 的构建第132-134页
  二、结果与分析第134-139页
 第二节 甘油脱水酶基因在表达载体pGEX-4T-1 上的构建第139-149页
  一、材料与方法第139-146页
   1、融合表达载体pGEX-gldBC 的构建第139-141页
   2、克隆载体pSIM-T-gldA 的构建第141-143页
   3、融合表达载体pGEX-gldABC 的构建第143-146页
  二、结果与分析第146-149页
 第三节 讨论第149-151页
  一、关于高效表达载体的选择第149-150页
  二、关于同向串联表达载体的构建第150-151页
 本章小结第151页
 参考文献第151-153页
第六章 结论与展望第153-158页
 一、主要结论第153-155页
 二、本论文创新点第155页
 三、有待于进一步开展的工作第155-156页
 四、展望第156-158页
致谢第158-159页
英文摘要第159-161页
攻读博士学位期间发表的学术论文第161页

论文共161页,点击 下载论文
上一篇:中国石油红旗石化公司发展战略研究
下一篇:高中生中文写作与英文写作的比较