| 第一章 巴氏毕赤酵母表达系统的特点及其研究进展 | 第1-27页 |
| 第一节 巴氏毕赤酵母表达系统的特点 | 第10-25页 |
| 1 宿主菌株 | 第11-12页 |
| ·巴氏毕赤酵母的生物学 | 第11页 |
| ·宿主菌株的类型 | 第11-12页 |
| ·酵母细胞的培养与诱导 | 第12页 |
| 2 酵母表达载体 | 第12-15页 |
| ·载体的结构特点 | 第12-14页 |
| ·载体的类型 | 第14页 |
| ·载体的选择标志 | 第14页 |
| ·巴氏毕赤酵母的转化 | 第14-15页 |
| 3 外源蛋白在巴氏毕赤酵母中的表达 | 第15-17页 |
| ·异源蛋白在酵母中表达的一般步骤 | 第15-16页 |
| ·重组蛋白的翻译后修饰 | 第16-17页 |
| 4 影响外源蛋白在巴氏毕赤酵母中表达的因素 | 第17-25页 |
| ·启动子的影响 | 第17页 |
| ·密码子的偏爱性与tRNA的丰度 | 第17-18页 |
| ·外源蛋白自身的理化特点 | 第18页 |
| ·信号肽的影响 | 第18-19页 |
| ·对重组转化子的筛选 | 第19页 |
| ·发酵条件的影响 | 第19-21页 |
| ·基因剂量对表达的影响 | 第21-22页 |
| ·mRNA 5’和3’非翻译区(UTR) | 第22页 |
| ·A+T组成 | 第22-23页 |
| ·载体的类型及宿主的表型 | 第23页 |
| ·翻译起始密码子AUG前后的序列 | 第23页 |
| ·产物稳定性 | 第23-25页 |
| 第二节 巴氏毕赤酵母表达外源蛋白的国内外研究现状 | 第25-27页 |
| 第二章 真鲷抗菌肽基因重组表达载体的构建 | 第27-39页 |
| 第一节 真鲷hepcidin和pleurocidin基因片段的扩增 | 第27-29页 |
| 1 实验材料 | 第27页 |
| 2 实验方法 | 第27-29页 |
| ·用来扩增真鲷抗菌肽基因的几对引物的设计 | 第27页 |
| ·用来扩增片段的PCR反应体系 | 第27-28页 |
| ·用来扩增目的片段的PCR反应循环条件 | 第28-29页 |
| ·电泳检验PCR产物 | 第29页 |
| 3 实验结果 | 第29页 |
| 第二节 真鲷抗菌肽基因PCR产物的连接 | 第29-39页 |
| 1 实验材料 | 第29-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-34页 |
| ·酵母表达载体的制备 | 第30-31页 |
| ·乙醇浓缩纯化PCR产物 | 第31页 |
| ·酶切PCR产物及大量制备的质粒 | 第31-32页 |
| ·电泳检验酶切产物 | 第32页 |
| ·凝胶回收酶切产物 | 第32-33页 |
| ·电泳测定回收产物的浓度 | 第33页 |
| ·连接回收产物 | 第33页 |
| ·连接产物的转化 | 第33-34页 |
| 3 实验结果 | 第34-39页 |
| 第三章 外源蛋白在巴氏毕赤酵母中的表达 | 第39-47页 |
| 第一节 巴氏毕赤酵母的电穿孔转化 | 第39-41页 |
| 1 实验材料 | 第39页 |
| 2 实验方法 | 第39-40页 |
| ·制备线性化质粒 | 第39-40页 |
| ·电穿孔转化 | 第40页 |
| 3 实验结果 | 第40-41页 |
| 第二节 阳性转化子的筛选 | 第41-46页 |
| 1 实验材料 | 第41页 |
| 2 实验方法 | 第41-43页 |
| ·表型筛选 | 第41页 |
| ·PCR筛选 | 第41-43页 |
| 3 实验结果 | 第43-46页 |
| 第三节 诱导表达 | 第46-47页 |
| 1 实验材料 | 第46页 |
| 2 实验方法 | 第46-47页 |
| ·酵母的增殖培养 | 第46页 |
| ·酵母的诱导培养 | 第46页 |
| ·酵母细胞的处理 | 第46-47页 |
| 3 实验结果 | 第47页 |
| 第四章 酵母表达外源蛋白质的鉴定及活性检测 | 第47-54页 |
| 第一节 酵母表达外源蛋白质的SDS-PAGE | 第47-50页 |
| 1 实验材料 | 第47页 |
| 2 实验方法 | 第47-49页 |
| ·制胶 | 第47-48页 |
| ·样品的处理、上样和电泳 | 第48页 |
| ·银染 | 第48-49页 |
| 3 实验结果 | 第49-50页 |
| 第二节 重组表达蛋白质的色谱分析 | 第50-51页 |
| 1 实验材料 | 第50页 |
| 2 实验方法 | 第50页 |
| ·重组蛋白质的分离纯化 | 第50页 |
| ·高效液相色谱 | 第50页 |
| 3 实验结果 | 第50-51页 |
| 第三节 重组表达蛋白质的抗菌活性检测 | 第51-54页 |
| 1 实验材料 | 第51-52页 |
| 2 实验方法 | 第52页 |
| 3 实验结果 | 第52-54页 |
| 第五章 小结 | 第54-60页 |
| 1 毕赤巴氏酵母用于表达外源蛋白的优点 | 第54-55页 |
| 2 表达载体的构建 | 第55页 |
| 3 酵母的转化 | 第55-56页 |
| 4 酵母转化子的筛选 | 第56-57页 |
| 5 酵母表达蛋白质的诱导培养 | 第57-58页 |
| 6 酵母分泌表达的蛋白质的性质及修饰 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-70页 |