| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 第一部分 综 述 | 第13-26页 |
| 1 基因工程药物的研究现状 | 第14页 |
| 2 动物毒素及其生物活性 | 第14-16页 |
| 2．1 水生动物毒素 | 第16页 |
| 2．2 两栖、爬行类动物毒素 | 第16页 |
| 2．3 节肢动物毒素 | 第16页 |
| 3 蜜蜂毒液的成分及药理活性 | 第16-19页 |
| 3．1 蜜蜂毒的成分 | 第17-18页 |
| 3．2 药理活性 | 第18-19页 |
| 4 蜂毒溶血肽的结构和功能 | 第19-24页 |
| 4．1 蜂毒溶血肽的化学组成和一级结构 | 第19-20页 |
| 4．2 蜂毒溶血肽的立体结构 | 第20-21页 |
| 4．3 蜜蜂体内的蜂毒溶血肽合成 | 第21-22页 |
| 4．4 蜂毒溶血肽的药理作用 | 第22-23页 |
| 4．5 蜂毒溶血肽在生物膜研究中的应用 | 第23-24页 |
| 4．6 蜂毒溶血肽在农业上的应用 | 第24页 |
| 4．7 蜂毒溶血肽的分离纯化 | 第24页 |
| 5 蜂毒溶血肽的分子生物学研究进展 | 第24-26页 |
| 第二部分 试验材料和基本实验方法 | 第26-42页 |
| 1 试验材料 | 第26-29页 |
| 1．1 基本试剂及生产厂家 | 第26-27页 |
| 1．2 酶和其它试剂 | 第27页 |
| 1．3 仪器、物品及生产厂家 | 第27-28页 |
| 1．4 动物材料 | 第28页 |
| 1．5 菌种及质粒 | 第28页 |
| 1．6 引物 | 第28-29页 |
| 2 基本实验方法 | 第29-42页 |
| 2．1 菌体培养与保存 | 第29-30页 |
| 2．2 质粒提取 | 第30-31页 |
| 2．3 质粒的纯化 | 第31-32页 |
| 2．4 质粒的酶切及载体与目的片段的连接 | 第32-33页 |
| 2．5 琼脂糖凝胶电泳 | 第33-34页 |
| 2．6 pGEM-3Zf（+）/HeaⅢ小分子量Marker的制作 | 第34页 |
| 2．7 DNA片段的回收 | 第34页 |
| 2．8 大肠杆菌（E coh）JM109感受态细胞的制备及转化 | 第34-36页 |
| 2．9 目的DNA片段PCR扩增 | 第36页 |
| 2．10 菌落直接PCR鉴定 | 第36页 |
| 2．11 含重组质粒菌落的鉴定 | 第36-37页 |
| 2．12 DNA末端的脱磷酸化 | 第37-38页 |
| 2．13 DNA序列分析 | 第38-39页 |
| 2．14 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）技术 | 第39-41页 |
| 2．15 引物的设计与合成 | 第41-42页 |
| 第三部分 蜜蜂毒腺RNA的提取与蜂毒溶血肽cDNA的克隆及序列分析 | 第42-50页 |
| 1 实验方法 | 第42-44页 |
| 1．1 蜜蜂工蜂毒腺总RNA的提取 | 第42-43页 |
| 1．2 逆转录反应 | 第43-44页 |
| 1．3 目的DNA片段RT-PCR扩增 | 第44页 |
| 1．4 蜂毒溶血肽cDNA的克隆 | 第44页 |
| 2 实验结果与分析 | 第44-48页 |
| 2．1 提取的RNA的质量分析 | 第44页 |
| 2．2 RNA提取的影响因素分析 | 第44-45页 |
| 2．3 RNA逆转录条件的优化 | 第45页 |
| 2．4 RT-PCR扩增目的DNA片断的分析 | 第45-46页 |
| 2．5 PCR扩增片段与T-载体的连接与转化 | 第46页 |
| 2．6 DNA序列分析结果及其与Gene Bank中的蜂毒溶血肽的编码序列比较 | 第46-48页 |
| 3 讨论 | 第48-50页 |
| 3．1 实验材料的处理和RNA提取方法的选择 | 第48-49页 |
| 3．2 具“校对”活性的Taq酶对PCR反应的作用 | 第49页 |
| 3．3 蜂毒溶血肽在工程细胞中表达的对策 | 第49-50页 |
| 第四部分 蜂毒溶血肽前体蛋白cDNA的克隆、序列分析及其在大肠杆菌中的表达 | 第50-59页 |
| 1 实验方法 | 第50-51页 |
| 1．1 目的DNA片段RT-PCR扩增 | 第50页 |
| 1．2 蜂毒溶血肽前体蛋白cDNA的克隆 | 第50页 |
| 1．3 菌体的培养和观察 | 第50-51页 |
| 1．4 蜂毒溶血肽前体蛋白在工程菌中表达的检测 | 第51页 |
| 2 实验结果与分析 | 第51-57页 |
| 2．1 RT-PCR扩增产物的电泳检测结果和对电泳带的分析 | 第51-52页 |
| 2．2 PCR扩增片段与T-载体的连接与转化 | 第52-54页 |
| 2．3 蜂毒溶血肽前体蛋白的融合蛋白表达载体构建过程与策略 | 第54页 |
| 2．4 DNA序列分析结果 | 第54-56页 |
| 2．5 含表达载体大肠杆菌在诱导培养基中的生长与分析 | 第56-57页 |
| 2．6 工程菌全蛋白的SDS-PAGE电泳结果与分析 | 第57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| 3．1 菌落直接PCR鉴定筛选重组子的技术的应用 | 第57-58页 |
| 3．2 用SDS-PAGE对小分子量多肽的分析 | 第58页 |
| 3．3 融合蛋白在工程菌中的表达对表达细胞无致死性的推测与证实 | 第58-59页 |
| 第五部分 蜂毒溶血肽cDNA的定点突变及其在大肠杆菌中的表达 | 第59-70页 |
| 1 实验方法 | 第59-60页 |
| 1．1 定点突变片段的PCR扩增及其克隆 | 第59页 |
| 1．2 定点突变的蜂毒浴血肽cDNA酶切重组 | 第59-60页 |
| 1．3 融合蛋白在工程菌中表达的检测 | 第60页 |
| 2 实验结果与分析 | 第60-67页 |
| 1．1 通过PCR对定点突变位点的引入和扩增片断克隆的分析 | 第60-63页 |
| 2．2 蜂毒溶血肽诱变蛋白cDNA的克隆及其大肠杆菌表达载体的构建 | 第63-64页 |
| 2．3 对诱变cDNA片段的测序及诱变蛋白SDS-PAGE结果与分析 | 第64-67页 |
| 3 讨论 | 第67-70页 |
| 3．1 利用PCR技术解决因DNA甲基化而导致的酶切重组困难 | 第67-68页 |
| 3．2 重组质粒蓝白斑筛选的有效性 | 第68-69页 |
| 3．3 定点突变的应用 | 第69-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 创新点 | 第71-72页 |
| 附-1 | 第72-73页 |
| 附-2 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 论文发表情况 | 第82-83页 |
| 致 谢 | 第83页 |
