| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 文献回顾 | 第10-36页 |
| 一、紫杉醇的研究 | 第10-13页 |
| (一) 紫杉醇的发现及其结构 | 第10-11页 |
| (二) 紫杉醇的临床研究 | 第11-12页 |
| (三) 紫杉醇的作用机理 | 第12-13页 |
| 二、细胞凋亡机理 | 第13-33页 |
| (一) 凋亡细胞的特征变化 | 第14-16页 |
| (二) 细胞凋亡的调控机制 | 第16-30页 |
| 1.ICE家族 | 第16-17页 |
| 2.TNF受体家族 | 第17-18页 |
| 3.癌基因与抑癌基因 | 第18-19页 |
| 4.Bcl-2家族 | 第19-30页 |
| (三) 紫杉醇诱导细胞凋亡的机理 | 第30-33页 |
| 1.调节p53基因作用诱导凋亡 | 第30页 |
| 2.促进Bcl-2磷酸化 | 第30-31页 |
| 3.通过Ras-Raf信号转导途径介导凋亡 | 第31-32页 |
| 4.激活JNK信号途径 | 第32页 |
| 5.细胞周期相关蛋白的介导 | 第32-33页 |
| 三、紫杉醇的耐药机理 | 第33-34页 |
| 四、核酶 | 第34-36页 |
| 前言 | 第36-37页 |
| 实验材料 | 第37-46页 |
| 一、细胞系 | 第37页 |
| 二、质粒与菌种 | 第37-40页 |
| 三、主要试剂 | 第40-41页 |
| 四、主要溶液配制 | 第41-44页 |
| 五、主要仪器 | 第44-46页 |
| 实验方法 | 第46-56页 |
| 一、细胞培养和药物处理 | 第46页 |
| 二、形态学观察 | 第46页 |
| 三、MTT法测定紫杉醇对肿瘤细胞的抑制率 | 第46-47页 |
| 四、细胞DNA提取和电泳观察 | 第47页 |
| 五、流式细胞仪测定细胞周期 | 第47页 |
| 六、Annexin V和TUNEL法检测细胞凋亡 | 第47页 |
| 七、载体构建 | 第47-48页 |
| 八、细胞转染 | 第48页 |
| 九、荧光素酶标记基因的检测 | 第48-49页 |
| 十、Bradford蛋白定量法 | 第49页 |
| 十一、总RNA提取 | 第49页 |
| 十二、探针标记 | 第49-51页 |
| 十三、核酸分子杂交 | 第51-53页 |
| 十四、免疫组化ABC法 | 第53-54页 |
| 十五、原位杂交 | 第54-55页 |
| 十六、间接免疫荧光 | 第55页 |
| 十七、Western blot | 第55-56页 |
| 结果 | 第56-105页 |
| 一、紫杉醇诱导的食管癌细胞凋亡 | 第56-75页 |
| (一) 形态学观察 | 第56-61页 |
| (二) MTT法测定紫杉醇对食管癌细胞生长抑制作用 | 第61-63页 |
| (三) 琼脂糖凝胶电泳观察梯状DNA | 第63-64页 |
| (四) 流式细胞术分析紫杉醇对Eca109细胞周期的影响 | 第64-68页 |
| (五) Annexin V检测早期细胞凋亡 | 第68-70页 |
| (六) TUNEL检测细胞凋亡 | 第70-75页 |
| 二、可诱导表达载体的构建 | 第75-81页 |
| (一) bcl-2核酶可诱导真核表达载体的构建 | 第75-77页 |
| (二) 荧光素酶报告基因及bax基因的可诱导真核表达载体的构建 | 第77-81页 |
| 三、细胞转染与检测 | 第81-105页 |
| (一) 转染荧光素酶基因 | 第81-84页 |
| (二) 转染bcl-2核酶 | 第84-96页 |
| (三) bcl-2核酶与bax基因共转染 | 第96-105页 |
| 讨论 | 第105-112页 |
| 一.紫杉醇诱导食管癌细胞凋亡和细胞周期阻断作用 | 第105-108页 |
| 二.转染bcl-2核酶降低Bcl-2蛋白表达 | 第108-112页 |
| 小结 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-128页 |
| 致谢 | 第128页 |
